Este video muestra la forma de crecer células madre embrionarias humanas (hESCs) en células embrionarias de ratón fibroblastos de alimentación (MEF).
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Artículo de método
Desde que me MEFs Matrigel: hESCs pases en la presencia de MEFs
En este artículo
Resumen
Resumen
Este video muestra la forma de crecer células madre embrionarias humanas (hESCs) en células embrionarias de ratón fibroblastos de alimentación (MEF).
Protocolo
Dividir las células madre embrionarias humanas (hESCs) chapada en fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs)
Por lo general, una placa de células madre confluentes se puede dividir 01:06-1:10, dependiendo de la línea de células madre en particular. La placa de división, confluyen de nuevo 5-7 días después de partir.
- Dos días antes de partir, gelatinizar las placas con una solución de gelatina al 0,1%. Para una placa de 6 pocillos, agregar 2 ml en cada pocillo de la placa y se incuba en un 37 ° C, 5% de CO 2 incubadora de cultivo de tejido durante la noche.
- Placa MEFs en gelatinizado placas de 6 pocillos el d....
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Discusión
Este video muestra la forma de crecer células madre embrionarias humanas (hESCs) en células embrionarias de ratón fibroblastos de alimentación (MEF). En el último paso antes de chapado, cuando la hESCs se resuspenden, deben ser de tamaño de las colonias más o menos uniforme y forma. Pipeta cuidadosamente la suspensión de células madre hacia arriba y abajo varias veces para que las colonias más pequeñas y más uniforme, pero no tanto que las células individuales o colonias muy pequeñas manchas generated.Immunofluorescence y citometría de fluj.......
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Agradecimientos
Estudios en humanos con células madre embrionarias en el laboratorio Teitell el apoyo de un Instituto de Medicina Regenerativa de California (CIRM), las semillas de subvención RS1-00313. Agradecemos a los miembros del Centro de Medicina Regenerativa de amplias e Investigación de Células Madre de la UCLA, en especial el Dr. Amander Clark, el doctor Jerome Zack, y los miembros del Fondo para el UCLA amplio núcleo de célula madre Instituto por el apoyo de nuestros estudios.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| Sustituto de suero para knockout (KSR) | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 11330-057 | |
| Aminoácidos no esenciales | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 11140-050 | |
| GlutaMax | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 35050-061 | |
| DMEM | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 11995-065 | |
| SFB | Reactivo | Clontech Laboratories | 631107 | |
| L-glutamina | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 25030-081 | |
| BME | Reactivo | Fisher Scientific | BP176-100 | |
| bFGF | Reactivo | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Colagenasa IV | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 17104-019 | |
| Dispasa | Reactivo | Stem Cell Technologies | 17105-041 | |
| Penicilina / Estreptomicina | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 15140-122 | |
| Gelatina | Reactivo | Chemicon International | ES-006-B | |
| Matrigel | Reactivo | BD Biosciences | 354277 | |
| Anticuerpo Oct-4 | Reactivo | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-9081 | |
| Anti-h/mSSEA-4 conjugado con fito–eritrina, ratón IgG3 | Reactivo | R&D Systems | FAB1435P | |
| Anticuerpo secundario IgG de conejo conjugado con FITC | Reactivo | Jackson ImmunoResearch | 715-095-152 |
Referencias
- Thomson, J. amesA., Itskovitz-Eldor, J. oseph, Shapiro, S. anderS., Waknitz, M. ichelleA., Swiergiel, J. enniferJ., Marshall, V. ivienneS., Jones, J. effreyM. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts. Science . 282, 1145-1147 (1998).
- Xu, C. hunhui, Inokuma, M. argaretS., Denham, J. errod, Golds, K. athaleen, Kundu, P. ratima, Gold, J. osephD., Carpenter, M. elissaK.
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Reimpresiones y permisos
