ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …
Summary
في هذا الفيديو ، ونظهر وسيلة بديلة للكشف عن الفيروسات وtitering باستخدام تقنية الكشف عن مستضد الأنزيمية المعروفة باسم مقايسة immunoperoxidase. هنا ، فإننا سوف تظهر لك كيفية جمع العينات الخاصة بك الفيروسية ، وإعداد الخلايا لاختبار ، وأخيرا باستخدام مقايسة immunoperoxidase التخفيفات المتسلسلة لتحديد عيار الفيروسية.
Abstract
حساب التتر الفيروسية المعدية يمثل نهجا الأساسية والضرورية لعلم الفيروسات التجريبي. لا يمكن المقايسات اللوحة الكلاسيكية تستعمل لأجل الفيروسات التي لا تسبب آثارا كبيرة الاعتلال الخلوي ، والذي هو الحال بالنسبة للسلالات 229E وOC43 التاجى الإنسان (HCoV). الموصوفة هنا بديلا مقايسة immunoperoxidase غير المباشرة (IPA) للكشف ومعايرة هذه الفيروسات. يتم تلقيح الخلايا عرضة لوغاريتمي مع التخفيفات المتسلسلة لعينات في لوحة 96 - جيدا. بعد النمو الفيروسي ، والكشف عن الفيروسات التي تعطي IPA عيار الفيروسات المعدية ، كما عبر عنها "نسيج الثقافة الجرعة المعدية" (TCID50). ويمثل هذا التخفيف من عينة الفيروس التي تحتوي على نصفها من سلسلة من الآبار تحتوي على مختبر الفيروسات تكرار. هذا الأسلوب هو أسلوب موثوق بها لمعايرة HCoV في العينات البيولوجية (الخلايا أو الأنسجة أو السوائل).
Protocol
بروتوكول النص الكامل لهذا النهج التجريبي هو متاح في البروتوكولات سبرينغر .
Tags
علم الأحياء المجهرية ، العدد 14 ، سبرينغر بروتوكولات ، التاجى الإنسان ، HCoV - 229E ، HCoV - OC43 ، الخلية وعينات الأنسجة ، المعايرة ، مقايسة immunoperoxidase ، TCID50Erratum
Formal Correction: Erratum: Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay
Posted by JoVE Editors on 04/01/2012.
Citeable Link.
A correction was made to: Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay. A revised abstract was republished due to a publisher error.
Revised Abstract:
Determination of infectious viral titers is a basic and essential experimental approach for virologists. Classical plaque assays cannot be used for viruses that do not cause significant cytopathic effects, which is the case for prototype strains 229E and OC43 of human coronavirus (HCoV). Therefore, an alternative indirect immunoperoxidase assay (IPA) was developed for the detection and titration of these viruses and is described herein. Susceptible cells are inoculated with serial logarithmic dilutions of virus-containing samples in a 96-well plate format. After viral growth, viral detection by IPA yields the infectious virus titer, expressed as 'Tissue Culture Infectious Dose 50 percent' (TCID50). This represents the dilution of a virus-containing sample at which half of a series of laboratory wells contain infectious replicating virus. This technique provides a reliable method for the titration of HCoV-229E and HCoV-OC43 in biological samples such as cells, tissues and fluids. This article is based on work first reported in Methods in Molecular Biology (2008) volume 454, pages 93-102.
Original Abstract:
Calculation of infectious viral titers represents a basic and essential experimental approach for virologists. Classical plaque assays cannot be used for viruses that do not cause significant cytopathic effects, which is the case for strains 229E and OC43 of human coronavirus (HCoV). An alternative indirect immunoperoxidase assay (IPA) is herein described for the detection and titration of these viruses. Susceptible cells are inoculated with serial logarithmic dilutions of samples in a 96-well plate. After viral growth, viral detection by IPA yields the infectious virus titer, expressed as "Tissue Culture Infectious Dose" (TCID50). This represents the dilution of a virus-containing sample at which half of a series of laboratory wells contain replicating virus. This technique is a reliable method for the titration of HCoV in biological samples (cells, tissues or fluids).
