نماذج معدلة وراثيا الماوس (تيراغرام) من م يوفر فرصة ممتازة لمعرفة كيف ولماذا أو Aβ تاو المستويات في CSF تتغير مع تقدم المرض في المرضى من البشر. هنا ، ونحن يبرهن على وجود ثقب المكرر ماجنا صهريج تقنية لأخذ عينات من السائل النخاعي التسلسلي الماوس.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقنية لجمع المسلسل من السائل النخاعي من ماجنا في صهريج للماوس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مرض الزهايمر (ميلادي) هو مرض الاعصاب التدريجي الذي يميزه عن طريق الترسيب مرضي من خارج الخلية β اميلويد ببتيد (Aβ) ، وتراكم للبروتين تاو intraneuronal hyperphosphorylated. لأن السائل النخاعي (CSF) هو على اتصال مباشر مع الفضاء خارج الخلية في الدماغ ، فإنه يوفر انعكاس للتغيرات بيوكيميائية في الدماغ ردا على العمليات المرضية. CSF من المرضى ميلادي نقصانا في شكل الحامض الأميني 42 من Aβ (Aβ42) ، والزيادة في إجمالي تاو تاو وhyperphosphorylated ، رغم ما زالت الآليات المسؤولة عن هذه التغيرات غير مفهومة تماما. نماذج معدلة وراثيا الماوس (تيراغرام) من م يوفر فرصة ممتازة لمعرفة كيف ولماذا أو Aβ تاو المستويات في CSF تتغير مع تقدم المرض. هنا ، ونحن يبرهن على وجود ثقب المكرر ماجنا صهريج تقنية لأخذ عينات السائل النخاعي من الماوس. هذا الأسلوب أخذ العينات لطيف للغاية يتيح الحصول على عينات من السائل النخاعي المسلسل من الماوس نفسه على فترات 2-3 الشهر الذي يقلل كثيرا من أثر الخلط بين الفأر التباين في مستويات أو Aβ تاو ، مما يجعل من الممكن الكشف عن التغييرات الطفيفة على مر الزمن. بالاشتراك مع Aβ وتاو ELISA ، فإن هذا الأسلوب مفيدا لإجراء دراسات تهدف إلى التحقيق في العلاقة بين مستويات Aβ42 CSF وتاو ، والتمثيل الغذائي في المخ في نماذج الماوس ميلادي. يمكن أن الدراسات التي أجريت في الفئران تيراغرام توفير التحقق من صحة المهم بالنسبة لإمكانات Aβ CSF أو مستويات تاو لاستخدامها كعلامات البيولوجية لمراقبة تطور المرض ، ورصد تأثير التدخلات العلاجية. كما يمكن التضحية الفئران ويمكن فحص أدمغة للتغيرات كيميائية حيوية أو النسيجي ، يمكن الآليات الكامنة وراء التغيرات CSF تقييمها على نحو أفضل. هذه البيانات من المحتمل أن تكون مفيدة لتفسير التغيرات البشرية CSF ميلادي.
البروتوكول
سحب أنبوب زجاجي الشعرية
- يتم شراء أنبوب زجاجي الشعرية من وثيقة المؤتمر الوطني العراقي سوتر (البورسليكات الزجاج ، B100 - 75 - 10).
- سحب الأنابيب الشعرية على سوتر P - 87 يلهب micropipette مجتذب ، مع مؤشر الحرارة التي وضعت في 300 ومؤشر الضغط على تعيين 330.
- تقليم غيض من أنبوب زجاجي الشعري مع مقص ، وحتى يتسنى للطرف مدبب ويبلغ قطرها الداخلي حوالي 0.5 مم.
صهريج تقنية ثقب ماجنا لCSF....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
صفنا بروتوكول موثوق بها للغاية لأخذ عينات من السائل النخاعي المسلسل من الفئران دون تلوث البلازما كشفها.
1. الإجراء كلها تستغرق عادة 10 دقيقة لكل الماوس (بما في ذلك التخدير). حجم حصلت CSF يعتمد على سلالات الماوس. في الفئران PS / APP تيراغرام نقرا نحن used2 ، متوسط حجم حوالي 5 ميكرولتر (3-7 ميكرولتر) ، في حين أن (JNPL3) الفئران P301L 3 تعطي عائدا من حوالي 10 ميكرولتر - 15 ميكرولتر. لأخذ العينات التسلسلي ، يمكن أن يكون الحد الأقصى ل08/07 ميكرولتر بأمان ات.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
ويدعم عملنا والمعاهد الوطنية للصحة منح NS048447 AG017216to دينار كويتي. وليو لى أود أن أشكر الدكتور هايكي Tanila (جامعة كيوبيو ، كيوبيو ، فنلندا) لإشرافه والدعم خلال وضع البروتوكول الأصلي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المراجع
- Liu, L., et al. Longitudinal observation on CSF Abeta42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice. Neurobiol Dis. 17, 516- (2004).
- Holcomb, L., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
استكشف المزيد من المقالات
جمع السائل الدماغي الشوكيبزل الصهريج الكبيرأخذ عينات السائل الدماغي الشوكي من الفأرالجمع المتسلسل للسائل الدماغي الشوكياستخدام الجهاز التجسيميتحضير الأنابيب الشعرية الزجاجيةتحليل السائل الدماغي الشوكي بواسطة مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيمنموذج فأر لمرض ألزهايمرقياس بروتين تاو وبيتا أميلويدالرعاية اللاحقة للجراحة للفئران
