Bu protokol disseke Drosophila larva immünohistokimya nasıl gerçekleştirileceği göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Drosophila Larvaların NMJ İmmünohistokimya
Bu makalede
Özet
Protokol
Başlamadan önce
- Aşağıdaki çözümleri hazırlayın: PBT (1X PBS içinde% 0.1 Triton X 100), PBTB (% 0.2 PBT olarak BSA) ve PBTN (2 PBTB% NGS).
- Drosophila larvaları parçalara ayır. Drosophila Larvaların NMJ Diseksiyon bakınız.
İmmünohistokimya
- PBT içeren 1.5 ml tüp larvaları taşıyın. Larvaların PBT 15 dakika boyunca iki kez yıkayın. Not: yıkamak, bir nutator karıştırıcı 1.5 ml tüp yerleştirin. Pippetor ile sıvı çıkarın ve temiz sıvı ile değiştirin.
- PBT çıkarın. 30 dakika boyunca iki kez PBTB yıkayın.
- PBTB çıkarın. 15 dakika boyunca iki kez PBTN yıkayın.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
NMJ görselleştirme sağlar çünkü immünhistokimyasal (İHK) NMJ biyoloji çalışması için hayati önem taşımaktadır. Bu nöronal membran (örneğin, HRP), presynapse (örneğin, CSP, SYT) ve / veya postsynapse (örneğin, DLG) tanıyan antikorlar kullanılarak yapılır. Sinyal molekülleri, yapısal protein, ya da ilgi roman proteinlerin de lekeli olabilir. Sonra, genler mutasyona uğramış veya missexpressed ve İHK sinaptik yapısı ve / veya nöronal sinyal pertürbasyon tespit edilebilir.
Drosophila NMJ.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Stereomikroskop “Stemi” 2000 | Carl Zeiss, Inc. | 495101-9804-000 | |
| Işık Kaynağı KL 1500 LCD | Carl Zeiss, Inc. | 000000-1063-181 | |
| Dumont SS Pens | Fine Science Tools | 11200-33 | |
| Dumont #5 Pens | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Adams™ Nutator Karıştırıcı | BD Biosciences | 421105 | |
| No.1 Hassas bıçak | X-Acto | 3201 | |
| No. 16 Bıçak uçları | X-Acto | 216 | |
| ProLong Gold Antifade reaktifi | Invitrogen | 36930 |
Kaynaklar
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
