Yetişkin zebrafish iç kulak duyu epitel yetişkin omurgalıların saç hücre yenilenmesini mekanizmaları anlamak için iyi bir model sistem. Bu protokol, hücresel ve hücre içi düzeyde yenileyici olaylar çalışmak için doku örnekleri elde edebilirsiniz epitel ince diseksiyon, göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Yetişkin Zebra balığı İç Kulak Duyu Epiteli Brüt ve Güzel Diseksiyon ( Danio rerio)
Bu makalede
Özet
Özet
Nörosensoryel epitel iç kulak, işitme ve denge fonksiyonları için önemli yapılardır. Bu nedenle, esas olarak iki tip hücre oluşan epitel, hücresel ve moleküler özelliklerini anlamak için önemlidir: saç hücreleri (HCS) ve destekleyen hücrelerin (SC'ler). Burada epitelyal yapılar çok incelenen bütün omurgalıların korunmuş çünkü yetişkin zebrafish sadece iç kulak duyu epitel çalışmak için seçer, ancak aynı zamanda yetişkin zebrafish HCS, memelilerde doğumdan kısa bir süre sonra kaybetmek bir yeteneği yeniden mümkün çünkü. Biz yetişkin zebrafish iç kulak HC kaybının bir sonucu olarak insan İşitme / denge açıklarının klinik tedavisi için yararlı olabilir yetişkin omurgalılarda iç kulak HC rejenerasyon mekanizmalarının çalışması için bir model sistem olarak kullanabilirsiniz.
Burada yetişkin zebrafish iç kulak duyu epitel kaba ve ince diseksiyonları nasıl göstermektedir. Brüt diseksiyonu, iç kulak çevresindeki dokuları temizler ve doku kesitlerinde, bize duyu epitel ayrıntılı yapısını incelemek için olanak hazırlamak için yararlı olur. Her bir epitel ince diseksiyon olmayan duyusal-epitel dokuların temizler ve bütün montaj epitel örnekleri kolayca tüm epitel heterojenite incelemek için bize sağlar.
Protokol
Bölüm 1: doku hazırlanması
- Yetişkin zebrafish Euthanize (Etil 3-aminobenzoate methanesulfonate tuz,% 0.03) MS-222 tamponlu.
- Balık başını kesmek. Alt çene kesilmiş, ventral yüzü diseksiyon pad üzerinde kafa yerleştirin ve böcek iğneli doku hareketsiz. Kafatası ventral yumuşak doku çıkarın ve bir diseksiyon mikroskobu altında ince cımbız bir çift ile kafatası kapsül ventral kısmı açık çatlamak.
- 4 ° C gecede paraformaldehid balık kafası (% 4) sabitleyin.
- Her seferinde 3 kez, 5 dakika (Fosfat 1X, Tuzlu Tamponlu) PBS içinde sabit balık kafası durulayın.
Bölüm 2: iç kulak Brüt diseksiyon
- ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol, biz bize duyu epitel hücre ve hücre içi eğitim için doku örneği hazırlamak için yetişkin zebrafish, iç kulak duyu epiteli, kaba ve ince diseksiyon nitelendirdi.
Başarılı bir diseksiyon, ilk adım, fiksasyon yürütmek için çok önemlidir. Eski çözüm diseksiyonu sırasında ele sert dokuların altında fiksasyon neden olacaktır, çünkü her zaman taze hazırlanmış paraformaldehid çözüm emin olun. Ancak, diseksiyonu sonra immün / histolojik boyama sonuçları ile müdahale edecektir, çünkü, çok.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Bu araştırma, Ulusal İnsan Genomu Araştırma Enstitüsü, Ulusal Sağlık Enstitüleri İntramural Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| MS222 (Etil 3-aminobenzoat metansülfonat tuzu) | Reaktif | Sigma-Aldrich | A5040 | |
| PBS (Fosfat tamponlu salin, 10X) | Reaktif | Mediatech, Inc. | 46-013-CM | |
| Paraformaldehit | Reaktif | Sigma-Aldrich | P-6148 | |
| Triton X-100 | Reaktif | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Alexa Fluor 488 falloidin | Reaktif | Invitrogen | A12379 | |
| DAPI içeren VECTASHIELD Sert Set Kapatma Ortamı | Reaktif | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Diseksiyon mikroskobu | Mikroskop | Nikon Instruments | SMZ1000 | |
| Böcek iğneleri | Araç | Fine Science Tools | 26000-40 | |
| Makas | Araç | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5880 | |
| Pens | Araç | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5045 | |
| İğne uçlu bıçak | Araç | Sharpoint | 78-6810 | |
| Floresan mikroskop | Mikroskop | Carl Zeiss, Inc. | Axiovert 200M | |
| Diseksiyon pedi | Araç | eNasco | SB07840M | |
| Zebrafish | Hayvan | Çeşitli | n/a |
Yeniden basım ve izinler
