, Yüksek kalite ve insan adacıklar uygun miktarda sağlamak başarılı bir adacık nakli için önemli önkoşullar biridir. Bu video, adım adım tarif insan pankreas adacık izolasyonu (Bölüm II: insan adacıklar arıtma ve kültür) için prosedürleri değiştirilmiş bir otomatik yöntemi kullanarak.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İnsan Pankreas Adacık İzolasyonu: Bölüm II: İnsan Islets saflaştırılması ve Kültür
Bu makalede
Özet
Özet
Tip 1 diyabet Yönetimi, yıl içinde 100 milyar dolar maliyet, hem birey ve toplum, külfetli. Glikoz izleme ve yeni insülin formülasyonları yaygın kullanımına rağmen birçok kişi hala yıkıcı ikincil komplikasyonlar gelişir. Pankreas adacık nakli, diyabetik hastalarda normal glukoz kontrolü yakın geri yükleyebilirsiniz
Protokol
1. Adacık saflaştırılması
- Adacık arıtma işlemi başlatmak için, COBE çanta yüklemek yeşil tüp hariç tüm tüpler kelepçe ve 0 1.500 için hızını ayarlamak ve süper.
- Kaputun pompa ve degrade bardak kurma ve toplama boru yeşil tüpüne bağlamak.
- : "Spin" sonra ön behere 110 ml Ficoll 1.100 itin ve COBE çanta yüklemek için pompa start Şimdi Ficoll 1.100 yükleme başlayabilirsiniz. Ficoll yüklü olduğundan, süper dışarı basın durdurmak pompa, pompa kafası çözülme ve 100 süper çıkış hızını ayarlamak.
- Ficoll beher ulaşır ve boru, pompa başında yeniden-klemp tüm hava dışarı atılır. 3.000 spin hız ve süper çıkış hızı 0 olarak ayarlayın. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Insan adacık izolasyon teknikleri konusunda önemli gelişmeler olmasına rağmen, adacık verimi son derece değişken ve öngörülemez kalır. Arıtma sindirilir pankreas dokusu nakli başarılı enzimatik sindirim sonra yeterli bir isle kütlesi kurtarmak için çok önemlidir. Bu yöntemi kullanarak, son derece saf bir insan adacıklar üstün bir kurtarma gösterildi, çünkü UIC arıtma yöntemi tavsiye edilir. Ayrıca, 50 ml kadar sindirilmiş doku böylece insan adacıklar iskemi ile ilişkili yaralanma izolasyon kullanılan toplam süre kısalta.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Adacık Hücre Kaynak Merkezi NIH hibe (RFA-RR 05-003), Christopher Vakfı Efroymson Vakfı ve Tellabs Vakfı olarak, Chicago Illinois Üniversitesi kurucu olarak tarafından desteklenen.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Santrifüj | ekipman | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| Cobe 2991 Hücre İşlemcisi | ekipman | Gambro. BCT | 2556 | adacık saflaştırma |
| MZ6 İnverted Mikroskopi TLBD4.1 | ekipman | Leica Microsystems | 4103 | |
| 2 mm Izgaralı Hücre Kültür Kabı | ekipman | Nalge Nunc international | 174926 | adacık sayımı |
| Digital Sight DS L1 | ekipman | Nikon Instruments | 217267 | |
| COBE torbası | tek kullanımlık ekipman | O.R. Solution | 66707003 | |
| T175 kültür flaskı | tek kullanımlık ekipman | Sarstedt Ltd | 83.1812.500 | |
| University of Wisconcin (UW) solüsyonu | reaktif | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Hank’s Tamponlu Tuz Solüsyonu (HBSS) | reaktif | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | reaktif | Bichrom AG | L6155 | |
| M199 besiyeri (yıkama solüsyonu) | reaktif | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| Final yıkama/Kültür Besiyeri | reaktif | Mediatech, Inc. | 99-785-CV | |
| Ditiyon | reaktif | Sigma-Aldrich | D5130 |
Kaynaklar
- Shapiro, A. M. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
