Kemirgen solunum fizyolojisi ve solunum yolu inflamatuar hücrelerin örnekleme tekrarlanan ölçümler arzu edilir, ancak genellikle mümkün değildir. Burada sözlü havayolu inflamatuar hücrelerin havayolu hiperreaktivite ve örnekleme tekrarlanan ölçümler izin verir fareler Entübasyon için tekrarlanabilir bir yöntem açıklanmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Havayolu Direnci Ölçümleri ve Fare Bronkoalveolar Lavaj Sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, Non-invaziv Yöntemi
Bu makalede
Özet
Özet
Havayolu hiperreaktivite (AHR) ölçümleri ve bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvısı örneklemesi, deneysel astım modelleri için gerekli olan, ama aynı hayvan gibi ölçümler elde etmek için tekrarlanır prosedürleri genellikle mümkün değildir. Burada, farelerde AHR ve bronkoalveoler lavaj sıvısı örnekleri tekrarlanan ölçümler elde etmek için protokoller göstermektedir. Fareler tedavi güçlü bir allerjen veya plasebo ile 14 gün boyunca intranazal yedi kez meydan vardı. Ilk meydan okuma öncesinde ve her intranazal meydan takip eden 24 saat içinde, aynı hayvanlar sözlü entübe ve mekanik ventilasyon, anesteziye edildi. Sahte ve alerjene meydan hayvanlar arasında asetilkolin (Ach) klorür intravenöz doz artırarak yol açtığı solunum sistemi direnci (RRS) doz cevap eğrileri karşılaştırılarak değerlendirilir AHR, tespit edilmiştir. Daha sonra, böylece hava yolu hücreleri bu diferansiyel numaralandırma yapılabilir ve aynı entübasyon ile, sol akciğere lavaj oldu. Bu çalışmalar AHR ve BAL sıvı toplanması tekrarlanan ölçümler aynı hayvanların mümkün olduğunu ortaya koyuyor ve bu maksimum hava yolu aşırı duyarlılığı ve havayolu eozinofili allerjen başlatılması 7-10 gün içinde elde edilir. Bu roman tekniği uzunlamasına deney için gerekli olan farelerin sayısını önemli ölçüde azaltır ve çeşitli kemirgen türleri, hastalık modelleri ve havayolu fizyolojisi aletleri için geçerli.
Protokol
Allerjen:
- C57BL / 6 fareler, yaş 4-8 hafta, derin genel anestezi elde etmek için 10 dakika boyunca oksijen buhar karışımı% 3.2 izofluran ile tasfiye hava geçirmez bir pleksiglas odasında anestezi.
- Intranazal allerjen sorunları (45μL OVA (22.5 mikrogram) ve 7μL A. oryzae (7 mg), PBS içinde) olmak üzere toplam yedi ardışık uygulamaları, Perşembe ve Pazar günleri, her Salı, yönetilmektedir.
Anestezi:
- Önce her bir allerjen, ve 7. meydan, fare, bir ışık hariç yuvasına yerleştirme önce 48 mg / kg etomidat (2 mg / ml) intraperitoneal yönetilmektedir.
- Basınç arka pençeleri (5-10 dk) başvur....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Çalışmada, astım ve diğer çeşitli hava yolu obstrüktif hastalıkları, biyomedikal araştırmanın aktif ve genişleyen bir alan oluşturmaktadır. Astım ile ilgili deneysel araştırmaların önemli bir bileşeni, değişen koşullar altında havayolu boyutu değişiklikleri ölçmek için kapasite. Provokatif meydan okuma, kurallı bir özelliği, astım ve ilgili akciğer hastalıkları ve solunum yolu olarak adlandırılan hava yolu aşırı duyarlılığının bir özellik yanıt aşırı hava yolu daralması, nefes darlığı ve diğer belirtiler, ölüm dahil önd.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Dr. W. Mintzer fiberoptik orotrakeal entübasyon gerçekleştirmek için öneri için teşekkür ederim. Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe U19AI070973, R01AI057696, K02HL75243 ve R01HL082487 tarafından desteklenir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
Havayolu fizyolojisi ölçüm yazılımı (Rescomp) özel hazırlanmış (415-519-4371 Millennium Premier Grup) oldu.
Veriler, Pentium III işlemci (Intel, Inc. Santa Clara, CA) ve dijital sinyal dönüştürücü 17-pin analog (National Instruments, # PC-LPM16) ile donatılmış, Windows XP çalıştıran bir PC iş istasyonu kullanılarak analiz edildi.
Buxco, Inc. Wilmington, NC, küçük bir hayvan havayolu fizyolojisi iş istasyonu özel (Millenium Premier Group) piyasada bulunan basınç dönüştürücüleri (parça no TRD5700 ve TRD4510), preamp modülleri (# MAX2270), kasa (part # MAX1320 kullanarak toplandı ) ve özelleştirilmiş bir küçük hayvan Pletismograf.
0.5mm dış çaplı ışık kaynağına bağlı fiber optik iplik, (Cole Palmer Aydınlatıcı, 41.722 serisi)
Vantilatör (Harvard Apparatus Mouse Vantilatör, # 687)
10 mm, 27ga iğne (BD Biosciences, kedi yok. 309.602)
Isı lambası
1 ml şırınga (BD Biosciences, kedi yok. 305.109)
4 kelepçeleri (Pony 3200 bahar kelepçe)
Entübasyon kılavuz için 0,5 mm dış tel
Hemasitometre
SuperFrost / plus mikroskop lamı (Fisher kedi yok. 12-550-15)
Shandon Filtre Kartlar (Termo kedi yok. 5.991.022)
Diferansiyel hücre slayt leke (Fisher kedi yok. 122.911)
Işık mikroskobu (Leica)
Sitospin 3 (Shandon)
20 GA, 1.25 inç ProtectIV intravenöz kateterler (Smith Tıp)
0,5 mm polimer fiber optik (Edmund Optik # NT02-532).
Kaynaklar
- Hamelmann, E. Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergic mice using barometric plethysmography. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 766-775 (1997).
- Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
