Koku için koku alma duyu nöronlarının elektrofizyolojik yanıtlar tek sensillum kayıtları kullanarak böcekleri ölçülebilir. Bu video makalede, sirke sineği antenler tek sensillum kayıtları nasıl gerçekleştirileceği gösterecektir ( Drosophila melanogaster) Ve sıtma sivrisinek maksiller palps ( Anofel gambiae).
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Böcekler Tek Sensillum Kayıtlar Drosophila melanogaster Ve Anofel gambiae
Bu makalede
Özet
Özet
Koku alma duygusu, gıdalar, arkadaşları, predatör ve bulmak için siteler 3 yöntemlerinin koloni böcekler için esastır . Böcek koku alma duyu nöronları (OSNs) koku alma organlarının yüzeyini kaplayan sensilla denilen duyu kılları, içine alınır. Her sensillum yüzey koku üzerinden geçmek ve belirli bir sensillum ev sahipliği OSNs duyusal dendritler banyoları sensillum lenf adı verilen bir sıvı içinde çözülür, küçük gözenekler ile kaplıdır. OSN dendritler odorant reseptör (OR) proteinleri ifade, hangi böceklerin koku-kapılı iyon kanalları 4, 5 olarak fonksiyon. OR ya artırır koku etkileşimi veya OSN bazal atış hızı azalır. Aksiyon potansiyelleri şeklinde Bu nöronal aktivitenin ilk temsili kalitesi, yoğunluğu ve odorant 6, 7 zamansal özellikleri bünyesinde barındırıyor.
Bu duyu kılları kolay erişim göz önüne alındığında, referans elektrot böceğin göz ya da vücudun lenf alınırken, sensillum lenf bir kayıt elektrodu getirerek tek OSNs ekstraselüler kayıtlar yapmak mümkün. Drosophila, bir ile dört OSNs arasında sensilla ev, ama her OSN genellikle karakteristik bir başak genlik görüntüler. Spike sıralama teknikleri, bireysel OSNs spike yanıtları atamak mümkün kılmaktadır. Bu tek sensillum kayıt (SSR) tekniği sensillum lenf ve OSNs 1, 2, 8 reseptör aktivitesi tarafından üretilen elektrik ani olarak referans elektrot arasındaki potansiyel farkı izler. Odorant yanıt ani sayısı değişiklikler, böcekler içinde koku kodlama hücresel temeli temsil eder. Burada, şu anda Drosophila melanogaster ve Anofel gambiae SSR gerçekleştirmek için laboratuarda kullanılan hazırlama yöntemi tarif ve sensillum özel bir şekilde koku ile indüklenen temsilcisi izleri .
Protokol
1. Koku dilüsyonları
- En koku parafin yağı çözünür. Ancak, DMSO veya etanol aynı zamanda özellikle kokuları için alternatif çözücüler olarak kullanılabilir. Cam şişe saf koku:: Uygun dilüsyonları (v v hacmi örneğin 01:10 hacmi) hazırlayın. Çoğu koku dilüsyonları oda sıcaklığında, ancak yüksek uçucu bileşikler için, bir haftalık çalışma dilüsyonları yapmak daha iyidir. Her sensillum farklı bir konsantrasyon aralığında farklı kokular yanıt verir. Drosophila, yararlı bir look-up tablosu için 6, 7, belirli bir sensillum kullanım için uygun konsantrasyonlarda bulunabilir .
Drosophila ve Anofel için: (parafin yağı v ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Olfaktör ipuçları yiyecek kaynakları, potansiyel arkadaşları ve yırtıcılar tanımlamak için organizmalar tarafından kullanılır. Olfaktör duyusal nöronları (OSNs), dış uyaranlara ve beynin bilgi ileri işlenmiş yüksek merkezleri arasındaki ilk aktarma merkezi. Drosophila melanogaster ve Anofel gambiae, OSNs kolayca erişilebilir ve koku ponponları tarafından uyarılır, elektriksel aktivitenin izlendiği olabilir.
Tek sensillum kayıt (SSR) tekniği, yaygın OSNs kayıt ve koku 6.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Parafin yağı | Kokular | Fluka | 76235 | |
| Yüksek saflıkta kokular (>98%) | Kokular | Sigma-Aldrich | Metil asetat #296996 1-okten-3-ol #74950 | |
| Filtre kağıdı şeritleri | Kokular | Fisher Scientific | 05-714-1 | Kromatografi kağıdı |
| Konnektörler | Kokular | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16x1/8" |
| Cam şişeler | Kokular | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
| Hava hattı plastik tüp | Koku İletimi | Python Products | 500PAL | |
| 1 serolojik pipet | Koku İletimi | Corning | 4101 | 10 mL |
| Plastik tüp | Koku İletimi | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050"x0.090"OD |
| Tek kullanımlık borosilikat cam Pasteur pipetleri | Koku İletimi | Fisher Scientific | 13-678-20A | 5-3/4 inç |
| Programlanabilir stimülasyon kontrolörü | Koku İletimi | Syntech | CS-55 | |
| Anti-vibrasyon masası | Elektrofizyoloji Ekipmanları | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
| Faraday kafesi | Elektrofizyoloji Ekipmanları | TMC | MI8133303 | |
| Ters mikroskop | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Nikon Instruments | E600FN ECLIPSE | Kayıt mikroskobu |
| 10x ve 100x objektifler | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Nikon Instruments | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
| Diseksiyon mikroskobu | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Nikon Instruments | EZ645 | elektrot bileme/böcek hazırlama mikroskobu |
| Manyetik standlar | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Newport Corp. | MODEL 150 | |
| IDAC | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Syntech | IDAC-4 | |
| Veri toplama yazılımı | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Syntech | Autospike | |
| 1 makromanipülatör | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Narishige International | MN-151 | Joystick manipülatör Referans elektrodu konumlandırmak için kullanılır |
| 1 mikromanipülatör | Elektrofizyoloji Ekipmanları | EXFO | PCS-6000 | Kayıt elektrodunu konumlandırmak için kullanılır |
| Timsah klips | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Pomona | AL-B-12-0 | |
| Elektrik kablosu | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Pomona | B-36-0 | Test Kablo Düzenleği |
| 2 elektrot tutucu | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Syntech | N/A | Tungsten tel elektrot için elektrot tutucular (2'li set) |
| AC probu | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Syntech | N/A | Evrensel tek uçlu prob (10xAC) |
| Tungsten elektrotlar | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Microprobes | M210 | düz tungsten çubuklar, 0.005x3 |
| Potasyum hidroksit | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Sigma-Aldrich | 221473 | |
| Şırınga | Elektrofizyoloji Ekipmanları | BD Biosciences | 301625 | 20 mL |
| Güç kaynağı | Elektrofizyoloji Ekipmanları | Wild Heerbrugg | ör. MTR32 | |
| Dikey çekici (puller) | Böcek hazırlama | Narishige International | PB-7 | |
| Jilet | Böcek hazırlama | VWR international | 55411-050 | |
| Dental mum | Böcek hazırlama | Patterson | 091-1503 | |
| Mikroskop lamı | Böcek hazırlama | Fisher Scientific | 12-550A | |
| Lameli | Böcek hazırlama | Fisher Scientific | 12-541A | 18X18 #1.5 |
| Polipropilen ağ | Böcek hazırlama | Small Parts, Inc. | CMP-0500-B | |
| Cam elektrot | Böcek hazırlama | Frederick Haer and Co. | 27-32-0-075 | Borosilikat kapiler tüp 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
| Çift taraflı bant (3M) | Böcek hazırlama | 3M | MMM6652P3436 | Çift taraflı bant (3M) |
| Pens | Böcek hazırlama | Fine Science Tools | 021x0053 | Dumont #5 Ayna Bitişli Pens |
| Küçük plastik kap | Böcek hazırlama | VWR international | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
| Elektrikli aspiratör | Böcek hazırlama | Gempler’s | RHM200 |
Kaynaklar
- Boeckh, J. Elektrophysiologische Untersuchungen an einzelnen Geruchsrezeptoren auf der Antenne des TotengrAbers (Necrophorus Coleoptera). Z. Vergl. Physiol. 46, 212-248 (1962).
- Schneider, D., Hecker, E.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
