Method Article

Geliştirici Maya Protein Konsantrasyonu bir işlev olarak Morfolojik Fenotip Kalkınma Analizi

DOI:

10.3791/1863

⸱

March 24th, 2010

 ,  , 
1Department of Biological Sciences and Purdue Center for Cancer Research, Purdue University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gen silme ve protein aşırı ekspresyonu proteinlerin işlevleri çalışmak için sık kullanılan yöntemlerdir. Bu makalede, bir nüfus protein konsantrasyonu fonksiyonu ve tek hücreli düzeylerde fenotip gelişimi analiz için bir protokol Saccharomyces cerevisiae.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gen silme ve protein aşırı ekspresyonu proteinlerin işlevleri çalışmak için sık kullanılan yöntemlerdir. Bu makalede, bir nüfus protein konsantrasyonu fonksiyonu ve tek hücreli düzeylerde fenotip gelişimi analiz için bir protokol

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A. Hücre Kültürü ve Protein İndüksiyon

Bu bölümde, hücre kültürü, maya hücreleri bir ayarlanabilir organizatörü protein ifade indüksiyon takip koşulları, hücre döngüsü Nocodazole ile senkronizasyonu, açıklamaktadır.

  1. Yaban tip maya suşu W303 (leu2-3, 112 trp1-1 can1-100 ura3-1 ade2-1 his3-11, 15) kontrolü altında ilgi bizim gen (ENTH2) içeren yüksek kopyasını (2μ) plazmid DNA ile dönüştürdü. metionin repressible organizatörü (MET25). Metionin 2mm metionin yoksun medya maksimum ifade sağlar promotor aktivitesi bastırmak için yeterli olacaktır. Bu nedenle, bir dizi metionin konsantrasyonları istenilen düzeyde pro....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, protein aşırı ekspresyonu üzerine morfolojik bir fenotip (uygun hücre bölünmesi geçmesi mümkün maya hücresi) gelişimini izlemek anlatılmaktadır. Bu işlemi yaparken, daha hızlı ve belirsiz sonuçlar hücreleri zarar verebilir olarak tavsiye santrifüj hızda peletleme maya hücreleri hasat hatırlamak önemlidir. Metilen mavisi ve Calcofluor beyaz toksik olarak hemen önce görüntüleme hücreleri yaşamak için ilave edilmelidir. Bu işlem aynı zamanda kolayca hedef kontrollü bir organizatörü ifade edilir, protein baskı .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Brian G. Coon ve Claudia B. Hanna yararlı tartışmalar ve destek için teşekkür ederiz. Bu proje, Dep start-up fonları tarafından desteklenen. Biyolojik Bilimler, Purdue Üniversitesi R. Claudio Aguilar ve R. Claudio Aguilar Purdue Kanser Merkezi aracılığıyla bir Amerikan Kanser Derneği Kurumsal Araştırma Bursu.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
NokodazolReaktifiSigma-AldrichM1404
Metilen Mavisi %1 (a/h)ReaktifVWR uluslararasıVW6276-0
Calcofluor BeyazReaktifSigma-AldrichF3543
VazelinReaktifiVWR uluslararasıVW3339-2

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rönicke, V., Graulich, W., Mumberg, D., Müller, R., Funk, M. Use of conditional promoters for expression of heterologous proteins in Saccharomyces cerevisiae. Methods Enzymol. 283, 313-322 (1997).
  2. Gietz, R. D., Woods, R. A.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Protein ConcentrationMorphological PhenotypeBudding YeastWestern BlottingMicroscopy AnalysisTime Lapse VideoSeptin MislocalizationCell Division DefectMethionine Repressible PromoterAgrose Bed Preparation

Related Articles