Xenopus embriyonik epitel, epitel morfolojilerinden sırasında kutup geliştirme ve şekil değişikliği gibi hücre davranışlarını incelemek için ideal bir model sistem . Geleneksel sabit örnekleri histoloji giderek canlı hücre konfokal görüntüleme tarafından tamamlanmaktadır. Burada, kurbağa dokularda izole ve canlı hücre konfokal mikroskopi kullanılarak canlı epitel hücreleri ve hücre iskeletinin görselleştirmek için yöntemler göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Canlı hücre Görüntüleme ve Kantitatif Analiz Embriyonik Epitel Hücreleri Xenopus laevis
Bu makalede
Özet
Özet
Embriyonik epitel hücreleri çok hücresel dokularda hücre yüzey alanı ve hücre yüksekliği değişiklikleri gibi kendi geometri değişiklikler, tabi burada morfolojilerinden okumak için ideal bir model olarak hizmet ve hücrelerin mitoz geçiren ve göç. Ayrıca, epitel hücreleri komşu dokulara morfogenetik hareketleri düzenleyen olabilir
Protokol
Başlamadan önce
- Standart yöntemler (Epicentre Biyoteknoloji, Madison, WI AmpliCap Transkripsiyon kiti), floresan tagged protein ve arındırır mRNA kodlama Lineerleştirilmiş DNA örneğinin kapaklı mRNA sentezlerler. mRNA tek seferlik kullanım için 0.2 ml santrifüj tüplerine aliquoted ve -80 ° C'de muhafaza edilmelidir
- Standart yöntemleri, in vitro fertilizasyon, yumurta elde etmek için yumurta kat kaldırılması ve daha önce 2 tarif edilmiştir . Xenopus laevis dişi kurbağanın yumurta elde etmek için bir prosedür daha önce 3 kanıtlanmıştır. In vitro yumurta, bir erkek kurbağanın daha önce ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Biz apikal hücre korteks ve Xenopus embriyolar epitel hücrelerinin hücre zarlarının salınan görüntü dinamik olarak değişen hücre iskeletinin laboratuvar düzenli olarak kullanılan deneysel protokolleri sundu. Bu protokolün optimizasyonu şarttır ve bazı ayarları bir mikroskop sistemi türüne bağlı olarak değişir ve proteinler bir tür görüntüleme ile ilgilenen; Bir epitel hücre şekilleri canlı görüntüleme için bir başlangıç noktası olarak bu protokoller kullanmanız gereken . Birlikte, protokol adımları (eksplant .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü (R01-HD044750), Ulusal Bilim Vakfı KARİYER hibe ve Amerikan Kalp Derneği (Başlangıç Hibe-in-Aid) destek tarafından desteklenmiştir. HY Kim, M. von Dassow ve J. Zhou (günlük laboratuvarı sorumlulukları ile ilgili yardım için) ve Lin Zhang, moleküler biyoloji ve sentezleme mRNA ona yardım için: Yazarlar Davidson Lab üyelerine teşekkür ederiz. Biz yıllar boyunca çeşitli yöntemler geliştirilmesi ve test ederek, bu protokol kısmı katkıda bulunmuştur kurbağa laboratuarları (özellikle Ray Keller ve Doug DeSimone) deneysel çabaları kabul etmiş oluyorsunuz. Richard Harland ve John Wallingford sırasıyla mem-GFP ve moesin-GFP plazmid tür hed....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Kaynaklar
- Ninomiya, H., Winklbauer, R. Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension. Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).
- Kay, B. K., Peng, H. B. Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , Academic Press. New York. (1991).
- Cross, M. K., Powers, M.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
