Method Article

Helios Gen Tabancası kullanarak Soğan Hücrelerde Protein-Protein Etkileşimi Bimoleküler Floresan tamamlama (BiFC) Testi

DOI:

10.3791/1963

⸱

June 12th, 2010

 , 
1Dept. Of Cell Biology and Molecular Genetics, University of Maryland

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale BioRad düzgün soğan epidermal hücrelerin içine plazmid DNA tanıtmak için Helios Gen Tabancası ve nasıl Bimoleküler Floresan tamamlama (BiFC) ilkesine dayalı soğan hücreleri protein-protein etkileşimleri test etmek için nasıl kullanılacağını göstermektedir

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çeşitli organizmaların gen fonksiyonu incelenmesi gen ürünleri, normal hücresel bir ortamda birbirleri ile nasıl etkileşimde bilgisine dayanmaktadır. Bimoleküler Floresan tamamlama (BiFC) Testi

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

I. Plazmid hazırlık

Bombardıman için kullanılan plazmid DNA 500ng/μl veya daha büyük bir konsantrasyon ve yüksek saflıkta olmalıdır. BiFC iki plazmid yapıları içeren, her plazmid 25 mg gereklidir. Diğer bir deyişle, iki plazmid 1:1 molar oranda kartuşlarının hazırlanması için 50 mg toplam plazmid DNA doğuran karıştırılmalıdır. 50 mg daha fazla DNA ekleyerek altın parçacıkları yığılma neden olabilir ve kaçınılmalıdır dikkatli olun. Ticari olarak mevcut plazmid DNA ekstraksiyon kitleri plazmid DNA'ları izole etmek için tavsiye edilir.

Plazmid vektörler bu pUC19 olarak boyutu oldukça küçük olmalıdır. Biz SEU ve LUH....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. GFP veya 35S:: GUS ilk kez kullanıcılar için, biz böyle 35S gibi tek bir plazmid kurucu muhabiri, kartuş hazırlanması gözlem, tüm prosedürü uygulamak öneririz. Biz 35S kullandı: plazmid GFP elde edilen Dr. Steve Mount ve Xiaoning Zhang 6 (Şekil 1A, D). RioRad (Kedi 165-2244) satılan gen atış kontrol kartuşları bitkiler için uygun değildir.
  2. BiFC için, ikinci bir pozitif kontrol sırasıyla YFP C-terminal ve N-terminal parçalara kaynaşmış iki bilinen etkileşim ortakları, oluşmalıdır gereklidir.
  3. BiFC için, bir.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz Dr teşekkür ederim. 35S Steve Mount ve Xiaoning Zhang: GFP pGlowbug inşa ve Z. L's laboratuvarda CH Araştırma Hokensen Doktora Bursu, ABD Ulusal Bilim Vakfı (IOB0616096 ve MCB0744752) tarafından desteklenmektedir. ZL, Maryland Zirai Araştırma İstasyonu Üniversitesi tarafından kısmen destekleniyor.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Sarı soğanHerhangi Bir Tedarikçi
Helios Gene GunBio-Rad
Zeiss, Nikon, Olympusiçin uygun filtreli floresan mikroskop
GFP veya YFP

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hu, C. D., Chinenov, Y., Kerppola, T. K. Visualization of interactions among bZIP and Rel family proteins in living cells using bimolecular fluorescence complementation. Mol Cell. 9 (4), 789-789 (2002).
  2. Sitaraman, J., Bui, M., Liu, Z.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Bimolecular Fluorescence ComplementationProtein Protein InteractionOnion Epidermal CellsHelios Gene GunFluorescence MicroscopyPlasmid BombardmentGold Particle CoatingSEU LUH InteractionYFP Fluorescence DetectionNegative Control Assay

Related Articles