Böcek Puparium Giderimi: Pupa Araştırması İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Fukutomi, Y., et al. Pupa Dönemlerini Evreleme ve Drosophila guttifera'nın Kanat Pigmentasyonunun Ölçümü için Yöntemler.J. Vis. Uzm. (2018).

Bu makale, bir böceğin pupariumunu çıkarırken, iç pupayı sağlam tutarken ve bu nedenle daha fazla araştırma için uygun hale getirme tekniğini açıklar. Örnek protokol, Drosophila guttifera ile prosedürü gösterir; ancak bu teknik diğer Drosophila türleri için de geçerlidir.

Protokol

Bu protokol, Fukutomi ve ark., Pupa Dönemlerini Evreleme Yöntemleri ve Drosophila guttifera'nın Kanat Pigmentasyonunun Ölçümü için Yöntemler, J. Vis. Exp. (2018).

1. Pupariumun çıkarılması

NOTE Drosophila'nın pupaları, puparium adı verilen bir yapı ile kaplıdır. Bir Muscomorpha böceği (sinekler) larva kütikülünü pupa sırasında dökmez; Bunun yerine, apolysis'ten sonra kütikülü sertleştirir ve onu pupa, puparium'un koruyucu bir örtüsü olarak kullanır. Bir puparium içinde bulunan bir pupa, çok yumuşak ve kırılgan olan gerçek bir pupa kütikülüne sahiptir. Apolis P4(ii) civarında gerçekleşmeden önce, epitel ve puparium birbirine bağlanır ve bu nedenle puparyumun zarar görmeden çıkarılması çok zordur. P5'ten sonra, puparyumun çıkarılması zahmetlidir, ancak morfolojik gözlem ve pupa evrelerinin tanımlanması için yararlıdır. İşlem şu şekilde gerçekleştirilir.

1. Bir parça kağıt havlu üzerine bir parça çift taraflı bant yapıştırın.
2. Çift taraflı bandın ventral tarafı yukarı bakacak şekilde bir pupa yerleştirin (Şekil 1A).
3. Pupariumun ön tarafı ile iç pupa arasındaki boşluğu bulun. Forseps kullanarak bu boşluğun etrafındaki puparyumu kavrayın ve çıkarın ve pupanın başının ön tarafını ortaya çıkarın.
4. Bir forsepsin ucunu ön-arka eksene paralel hareket ettirerek yerleştirin. Puparium'u yerel olarak kırmak için forsepsin ucunu kaldırın. Kırılma pupariumun arka kısmına ulaşana kadar bu işlemi tekrarlayın. Puparium ve pupa bacaklar arasında da bir boşluk oluştuğundan emin olun ve pupariumun ventral tarafını kırın ve iç pupaya verilen hasarı en aza indirin (Şekil 1B).
5. Puparium'u mümkün olduğunca kırdıktan sonra, ince bir boya fırçası (#5/0) kullanarak pupayı çıkarın (Şekil 1C).
6. Pupayı ddH₂O ile nemlendirilmiş ve plastik bir Petri kabına (çap 60 mm x yükseklik 15 mm) yerleştirilmiş bir kağıt mendil üzerine yerleştirin. Açıkta kalan pupa savunmasız olduğu ve kolayca kuruduğu için mümkün olan en kısa sürede fotoğraf çekin.
    

Sonuçlar

Şekil 1. Puparium'u çıkarma çizimi.(A) Bir pupa ventral tarafı yukarı bakacak şekilde bir çift taraflı bant parçası üzerine yerleştirin. Puparium'un ön kısmını çıkarın. (B) Puparium'u ventral taraftan forseps ile kırın. (C) Puparium'u kırdıktan sonra, bir boya fırçası kullanarak pupayı çıkarı...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Drosophila guttifera	U.C. San Diego'daki Drosophila Tür Stok Merkezi	15130-1971.10	Drosophila guttifera, bu makalede kullanılan bir meyve sineği türü
NICETACK çift taraflı bant	Nichiban Belediyesi	NW-15SF	Puparium çıkarmak için çift taraflı bant
Dumont #5 forseps	Güzel Bilim Araçları	11252-20	Forseps, puparium çıkarmak için
Van Gogh GÖRSEL Boya fırçası	Talens Japonya	GWVR-#5/0	Puparium çıkarmak için boya fırçası
Stereomikroskop	Olympus	SZX16	Morfolojik gözlem için stereomikroskop
Dijital fotoğraf makinesi	Olympus	DSE-330-A	Görüntüleme için dijital kamera
Falcon standart doku kültürü kabı	Corning	353002	Plastik Petri kabı (çap 60 mm x yükseklik 15 mm)

Dizüstü Bilgisayar Serisi Serisi