Kaynak: Koemans, T. S., et al. Öğrenme ve Hafızanın Bir Ölçüsü Olarak Drosophila Kur Yapma Koşullandırması. J. Vis. Uzm. (2017).
Bu videoda, Drosophila’da öğrenme ve hafızayı test eden ve kur yapma koşullandırması adı verilen klasik bir koşullandırma testi açıklanmaktadır. Tahlil, alıcı olmayan prematize edilmiş bir kadın tarafından reddedildikten sonra erkek flörtünün azaltılmasına dayanır. Örnek protokol, kısa ve uzun süreli belleği değerlendirmek için kullanılabilecek yordam için bir kurulum gösterir.
Bu protokol, Koemans ve diğerleri, Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory, J. Vis. Exp. (2017).
NOT: Aşağıda özetlenen protokolde, toplama, eğitim ve testin bir kopyası açıklanmıştır. Sonuçların tekrarlanabilirliğini test etmek için, bu adımlar paralel olarak, birden fazla günde ve ayrı sinek gruplarıyla tekrarlanmalıdır (Tablo 1). Protokol, yumurtadan yetişkine kadar 10 günlük bir yaşam döngüsüne dayanmaktadır ve bu, 25 °C, %70 nem ve 12 saatlik aydınlık/karanlık döngüsü sabit koşulları altında sinek yetiştirirken normaldir. Bu protokolün tüm yönleri, koşulların tüm tahlil boyunca sabit tutulduğunu varsayar. Süreler, araştırmacının günün tercih ettiği saate bağlı olarak uygun şekilde ayarlanabileceğinden, inkübatörde ışıklar açılmadan önceki (BLO) veya ışıklar açıldıktan sonraki (ALO) saatler olarak gösterilir. CO2 gazını sadece saf erkek sineklerin ilk toplanması ve prematize dişilerin toplanması için kullanın. Kur yapma koşullandırması için bu protokol aşağıdaki adımlardan oluşur:
1. Premated Kadın Koleksiyon Kültürlerinin Oluşturulması
2. Erkek deneklerin toplanması için kültürlerin oluşturulması
3. Konut Bloklarının Hazırlanması (Şekil 2A)
4. Standardize Edilmiş Premated Dişilerin Üretimi için Çiftleşme Şişelerinin Kurulması
5. Erkek Deneklerin Toplanması
6. Eğitim
7. Test etme
8. Video Veri Analizi ve İstatistik
<em>P{KK101437}VIE-260B</em> | VDRC | 101437 | Dhat-at-RNAi in 60100 background |
<em>P{KK108109}VIE-260B</em> | – | – | Control-RNAi in 60100 background (gift from K. Keleman) |
<em>w+, UAS-dcr2/yhh;;elav-Gal4 (III)</em> | – | – | panneuronal driver line |
Containers for plant tissue culture | VWR | 960177 | 175 mL plastic vials |
Folded filters | Whatman | 10311643 | Filter paper to enlarge area flies can pupate on |
Flat-bottom blocks (96-wells) | Qiagen | 19579 | Used for housing blocks |
MicroAmp Clear Adhesive Film | Applied Biosystems | 4306311 | PCR adhesive film as lid on flat-bottom blocks |
Razor blade | – | – | Any sharp will do |
Needle | – | – | 0.8 mm diameter |
Aspirator | – | – | Cut a 1mL pipet tip with scissors in order to have two pieces. The narrow tip of the pipettip is placed as fly entrance in a ~80 cm flexible hose. To prevent a fly from getting in the hose, a normal piece of cotton or small mesh gaze is placed in between the tip and the hose. The other half of the pipettip can be used as mouth piece at the end of the hose. |
Courtship chambers | – | – | file S1 can be opened with indicated CAD software |
Camcorder | Sony | – | camera specification: >4M pixels, full HD. |
For manual quantification, any simple video recording device has the potential to produce a video of sufficient quality to observe courtship behavior accurately. For automated quantification, there will likely be different requirements depending on the software to be used, and users should investigate this thoroughly if automated quantification is desired. | |||
<strong>Name</strong> | <strong>Company</strong> | <strong>Catalog Number</strong> | <strong>Comments</strong> |
power food | |||
Agar | Sigma | A7002 | |
Yeast | Bruggeman | – | |
Yeast extract | MP biomedicals | 0210330391 | |
Peptone | Sigma | P6838 | |
Sucrose | Sigma | S9378 | |
Glucose | Sigma | G7021 | |
MgSO4 | Sigma | M2643 | |
CaCl2 | Merck | 1023780500 | |
Methylparabene (CAUTION) | Sigma | H5501 | |
Propionic acid (CAUTION) | Sigma | P1386 | |
Demineralized water | – | ||
Yeast paste | – | yeast grains and water mixture in a 1:1 ratio | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
normal food | |||
Agar | MP biomedicals | 215017890 | |
Yeast | bruggeman | – | |
Corn flour | de Molen | – | |
Sugar | de Molen | – | |
Methylparabene (CAUTION) | Sigma | H5501 | |
Propionic acid (CAUTION) | Sigma | P1386 | |
Demineralized water | – |