Sinek Tırmanma Deneyi: Drosophila melanogaster'de Genel Hareketi Test Etmek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Gevedon, O., et al. Drosophila melanogaster'de Yeni Nöroprotektif Genleri Tanımlamak için İn Vivo İleri Genetik Ekran. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu video, sinek hareketini ölçmek için basit bir yöntemi açıklar ve gerçekleştirilen tırmanma testini gösterir. Sinek tırmanma testi, negatif bir jeotaksi tepkisine dayanan genel bir motor fonksiyon testidir.

Protokol

Bu protokol, Gevedon ve ark., Drosophila melanogaster'deki Yeni Nöroprotektif Genleri Tanımlamak için In Vivo İleri Genetik Ekran, J. Vis. Uzm.(2019).

1. Tırmanma Testi (Ali ve ark., J. Vis. Exp. (2011)

1. Tırmanma testini doğrulayın. Bu çalışmada, Ali ve arkadaşları tarafından daha önce açıklanan metodolojiye dayalı tırmanma testi, Elav^C155>UAS-Tau^R406W (daha düşük tırmanma geçiş oranları sergileyen) ve Elav^C155>UAS-GFP (kontrol) ve Elav^C155>UAS-mCherry (kontrol) sinekleri kullanılarak test edilmiştir.
2. Sinekleri her seferinde bir satır olacak şekilde bir test odasına çevirin (CO₂ anestezisi kullanmayın) ve 5 dakika boyunca iyileşmelerine izin verin. Test farklı günlerde yapılıyorsa, testi günün aynı saatinde yapın. Bu çalışmada, sirkadiyen hareket üzerindeki etkileri kontrol etmek için tüm tırmanma testleri öğleden sonra yapıldı.
   NOTE Test ederken sinekleri doğrudan güneş ışığına maruz bırakmaktan kaçının; Bu, tırmanma yeteneklerine müdahale edecektir.
3. Hazneyi (işaretli tarafı aşağı bakacak şekilde) katı bir yüzeye yerleştirilmiş bir mouse pad'e 3 kez zorla vurun, böylece tüm sinekler teste alttan başlar. 10 saniyelik bir süre boyunca sinek hareketini gözlemleyin.
4. Bu süre içinde 5 cm'lik çizgiye ulaşan veya geçen sinek sayısını ve test edilen toplam sinek sayısını kaydedin. Satır başına en az 3 deneme tekrarı için her deneme arasında 1 dakika bekleyerek protokolü tekrarlayın.
   NOT Bu çalışmada, her flakon, ilk tarama için 2 ila 19 sinek (erkek sinekler) ve çapraz dişi hatların mutant eksiklik analizi için 6 ila 21 sinek içeriyordu.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
VWR® Drosophila flakon; Dar	VWR	75813-160
VWR® Genel Amaçlı Laboratuvar Etiketleme Bandı	VWR (VWR)	89097-912
Standart mouse pad
stereoskop	Motic (Hareketli Müzik)		Modeli: SMZ-168
Drosophila Kuluçka Makinesi	VWR (VWR)	89510-750
R yazılım paketi

arası