Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Larva Lenf Bezi Diseksiyonu: Drosophila Hemosit Üreten Organın İzole Edilmesi

4.9K görüntüleme

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

Kaynak: Reimels, T. A. ve Pfleger, C. M. Drosophila larvalarında lenf bezi ve hemositleri inceleme yöntemleri. J. Vis. Uzm. (2016).

Bu video, sinek larvasındaki hematopoezin birincil bölgesi olan Drosophila lenf bezini tanımlar ve immünohistokimya ve floresan görüntüleme için organı incelemek ve monte etmek için örnek bir protokol gösterir.

Protokol

Bu protokol, Reimels ve Pfleger, Drosophila Larvalarında Lenf Bezi ve Hemositleri İnceleme Yöntemleri, J. Vis. Exp. (2016).

1. Larva Lenf Bezi İmmünohistokimyası

NOT: Lenf bezi, sırt tarafında beynin biraz altında bir larvanın ön ucundan yaklaşık üçte bir uzunlukta bulunur. (Şekil 1 B'deki oka bakın.) Lenf bezi sırt damarını çevreler ve en kolay şekilde disseke edilir, ağız kancalarına veya beyne bağlanır. Vahşi tip, üçüncü instar lenf bezleri çok küçük yapılardır; Birincil loblar yaklaşık 100 - 200 μm uzunluğundadır. (Bk....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

figure-results-1
Şekil 1: İn vivo kristal hücre melanizasyonu. A) Larvalar, ısıtılmadan önce PCR tüplerine tek tek yerleştirildi. Kırmızı oklar, tüplerin dibinde olmayan larvaları gösterir. B) Isıtıldıktan sonra, bazen lenf bezini ortaya çıkaran tipik bir kristal hücre melanizasyon paterni (ok; sırt tarafı gösterilmiştir, ön soldadır). Ölçek çubuğu 1 mm'yi temsil eder.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
PBS tabletleriMP Biyomedikal2810305
diseksiyon tabağıCorning7220-85
mikrosantrifüj tüpüDenvilleC2170
Sylgard 184 kitinden yapılmış silikon diseksiyon pediKrayden (Fisher aracılığıyla dağıtıldı)NC9644388 (Fisher katalog numarası)Sylgard elastomer kitinin bileşenlerinin üretici talimatlarına göre karıştırılmasıyla petri kabında yapılır.
stereomikroskopMorrell Instruments (Nikon distribütörü)MNA42000, MMA36300Nikon modelleri SMZ1000 ve SMZ645
Mendil silmeVWR (VWR)82003-820
ForsepsElektron Mikroskobu Bilimleri72700-DZ
P200 PipetEppendorf Belediyesi3120000054
FormaldehitbalıkçıBP531-500
TritonbalıkçıBP151-500
Ara 20balıkçıBP337-500
sığır serum albüminiKayalık Dağ BiyolojikleriBSA-BSH-01K Serisi
normal keçi serumuSigmaG9023-10ML
normal eşek serumuSigmaD9663-10ML
200 geçirmez etanolVWR (VWR)V1001
N-propil gallatMP Biyomedikal102747
GliserolVWR (VWR)EM-4750
DAPI (4 ', 6-diamidino-2-fenilindol)balıkçı62248
mikroskop kapak camı, 18 mm daireselbalıkçı12-545-100
Cam Mikroskop Slaytlarıbalıkçı22-034-980
24 oyuklu plakaCorning351147
Tek Kullanımlık Transfer Pipetibalıkçı13-711-9
floresan mikroskobuZeissAxio Görüntüleyici.Z1
Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi

Etiketler

Drosophila LarvalarHemosit retimimm nohistokimyaFloresan G r nt lemePens Manip lasyonuPBS TamponuDiseksiyon MikroskobuLenf Bezi B lgeleriDorsal Damar