Yöntem makalesi

İmmün boyama için sabit Drosophila oositlerinin hazırlanması: dış zarı sabitlemek ve çıkarmak için yüksek verimli bir yöntem

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Radford, S. J., McKim, K. S. Sabit Drosophila Oositlerinde Mayoz I'in Prometafazını ve Metafazını Görüntüleme Teknikleri. J. Vis. Uzm. (2016).

Drosophila geç evre oositlerinin immün boyanması, oositlerin çevresindeki zarlar nedeniyle zor olabilir. Bu videoda, oositlerin elde edilmesi, bunların sabitlenmesi ve immün boyama için zarların çıkarılması için yüksek verimli bir yöntem açıklanmaktadır. Öne çıkan protokol, mayoz bölünmenin farklı aşamalarını görselleştirmek için kullanılan geç evre oositlerle bu teknikleri göstermektedir.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol Radford ve McKim, Sabit Drosophila Oositlerinde Mayoz I'in Prometafazını ve Metafazını Görüntüleme Teknikleri, J. Vis. Exp. (2016).

NOT: Aksi belirtilmedikçe işlemler oda sıcaklığında gerçekleştirilir. Sıcaklık kontrollü inkübatörler, aksi belirtilmedikçe sinek yetiştirme ve melezleme için sıcaklıkları korumak için kullanılır.

1. Hazırlıklar

  1. Sinekleri hazırlayın.
    1. Prometafaz ile zenginleştirilmiş oosit koleksiyonları.
      1. Sağlıklı, genç stoklardan veya çapraz kültürlerden temiz yetişkin sinekler. Şişeleri 25 °C.
        sıc....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
ilaççözücüStok konsantrasyonuSon konsantrasyonTedavi zamanıetki
kolşisinetanol125 milyon150 μM10 dk veya 30 dkKinetokor Olmayanların Dengesini Bozun (10 dk)
veya tüm.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
% 16 formaldehitTed Pella, Inc.18505TEHLİKELİ; açıldıktan sonra bir ay sonra atın
250 ml beherçeşitli
5 ml'lik tüplerçeşitli
aktif kuru mayaçeşitliFıstık ezmesi kıvamında bir macun yapmak için suyla karıştırın
Binucleine 2SigmaB1186tehlikeli
Blenderçeşitli
sığır serum albüminiSigmaA4161
kalsiyum klorürçeşitli
kolşisinSigmaC-9754tehlikeli
lamellerVWR (VWR)48366-227Hayır. 1 1/2
DMSO (Türkçe)çeşitli
EGTA (EGTA)çeşitli
etanolçeşitli
ForsepsTed Pella, Inc.5622 Haber KaynağıDumont cımbız yüksek hassasiyetli sınıf stil 5
cam kaydıraklarVWR (VWR)48312-003
glikozçeşitli
HEPES ÜNİVERSİTESİVWR (VWR)EM-5330Birkaç satıcıdan temin edilebilir
magnezyum klorürçeşitli
Büyük ağ (~1.500 μm)VWR (VWR)AA43657-NKçeşitli formatlar ve diğer tedarikçiler, 12 veya 14 ağ
küçük ağ (~300 μm)Spektrum laboratuvarları146 424çeşitli biçimler, örneğin 146 422 veya 146 486
nutatörçeşitli
Pastör pipetleriçeşitli
potasyum asetatçeşitli
Kakodilik asitSigmaC0125TEHLİKELİ; Alternatif olarak, sodyum kakodilat ikame edilebilir
potasyum hidroksitçeşitli
sodyum asetatçeşitli
sodyum hidroksitçeşitli
Sakarozçeşitli
Taksol (paklitaksel)SigmaT1912 Serisitehlikeli
Triton X-100balıkçıPI-28314
Ara 20balıkçıPI-28320
girdapçeşitli
Adet Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Oosit FiksasyonuMembran Uzakla t rmammunboyama ProtokolHeptan FiksasyonuMekanik Ay rmaA FiltrelemeCam Lam Haz rlamaMayoz I BoyamasKorion Uzakla t rma

İlgili makaleler