Drosophila In Vivo Kalsiyum Görüntüleme: Nöronal Aktivitenin Fonksiyonel Görüntülenmesi İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Hancock, C. E., et al. Drosophila melanogaster'de Öğrenme Kaynaklı Sinaptik Plastisitenin İn Vivo Optik Kalsiyum Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu videoda, GCaMP kullanılarak Drosophila nöronlarında in vivo kalsiyum görüntüleme açıklanmaktadır. Öne çıkan protokol klibi, bir koku alma koşullandırma deneyi sırasında mantar vücut nöronlarından GCaMP floresansındaki değişikliklerin nasıl kaydedileceğini gösterir.

Protokol

Bu protokol, Hancock ve ark., Drosophila melanogaster'de Öğrenme ile İndüklenen Sinaptik Plastisitenin İn Vivo Optik Kalsiyum Görüntülemesi, J. Vis. Uzm.(2019).

1. İn vivo kalsiyum görüntüleme

1. Titreşim yalıtımlı bir masaya monte edilmiş, kızılötesi lazer ve suya daldırma objektifi ile donatılmış bir çoklu foton mikroskobu kullanın (Malzeme Tablosuna bakınız). GFP tabanlı kalsiyum göstergelerinin görselleştirilmesi için lazeri 920 nm'lik bir uyarma dalga boyuna ayarlayın ve bir GFP bant geçiren filtre takın.
2. Kaba Z ayar düğmesini kullanarak beynin Z eksenini tarayın ve ilgilen....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1-Okten-3-ol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	O5284	Koku verici olarak kullanılan kimyasal
3-Oktanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	218405	Koku verici olarak kullanılan kimyasal
4-Metilsikloheksanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	153095	Koku verici olarak kullanılan kimyasal
EGFP için bant geçiren filtre (525/50 nm)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Almanya
Mineral yağ	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	M8410	Koku vericiler için seyreltici olarak kullanılır
Mod kilitli Ti-Safir lazer Chameleon Vision 2	Tutarlı Inc., Santa Clara, CA, ABD		Ayarlanabilir kızılötesi femtosaniye lazer
BiG dedektörleri ile donatılmış Multifoton Mikroskobu LSM 7MP	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Almanya		Çoklu foton mikroskobu, birden fazla şirket benzer cihazlar sağlar.
Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0) suya daldırma objektifi	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Almanya	421452-9900-000	Objektif W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Koku verme cihazından ve elektrik çarpması uygulama cihazından (güç kaynağı) bir tetikleyici almak için Visual Basics of Applicatons (VBA) yazılımı, mikroskobu kontrol eden Zeiss'ın ZEN yazılımı ile etkileşime girmek için	Özel olarak yazılmış ve istek üzerine temin edilebilir	N.A.	N.A.

Serisi Serisi