Etanol Fiksasyonu ve DAPI Boyama: C. elegans'ta DNA'yı Görselleştirmek İçin Bir Yöntem

Abstract

Kaynak: Clarke, E. K., et al. Caenorhabditis elegans'ta Ploidi Manipülasyonu. J. Vis. Uzm. (2018).

Burada, sabit, bozulmamış nematodlarda genomik DNA'yı görselleştirmek için kullanılan bir tekniği açıklıyoruz. Video, döllenmemiş C. elegans oositlerindeki kromatini saymak için örnek bir protokol içerir.

Protocol

Bu protokol, Clarke ve ark. Caenorhabditis elegans'ta Ploidi Manipülasyonu, J. Vis. Exp. (2018).

Tetraploid suşları, döllenmemiş oositlerindeki kromozom sayısı sayılarak doğrulanabilir. Floresan mikroskobu, suşun kromozomlar için bir floresan işaretleyicisi varsa, döllenmemiş diploid oositlerde (mayotik bölünmelerden önce) kromozom çiftlerinin sayısını taramak için kullanılabilir. Floresan kromozom belirteçlerinin yokluğunda, tetraploid nematodlar, nematodların sabitlenmesi ve bir DNA boyası ile boyanma....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Diseksiyon Mikroskobu	Motic Mikroskopi	SMZ171
Name	şirket	Katalog Numarası	Yorum
Boyama
Hoechst 33258, Pentahidrat	Biyotyum	40045
DAPI	Biyotyum	40011
Name	şirket	Katalog Numarası	Yorum
Etanol Fiksasyonu
Etanol, Saf, 190 Kanıt (%95), USP	Koptec, VWR	89125-166
Name	şirket	Katalog Numarası	Yorum
M9 Tamponu
Sodyum klorür, Biyoteknoloji Sınıfı	VWR (VWR)	97061-278
Potasyum fosfat, Monobazik Susuz Sınıf	VWR (VWR)	97062-346
Sodyum fosfat, monobazik dihidrat	Balıkçı Bilimsel	AC271750025