Yüzmeye Bağlı Felç (SWIP) Testi: Dopamin Aracılı Hareketi Ölçmek İçin Bir Yöntem C. elegans

Aşağıdaki protokol, Kudumala ve ark., Caenorhabditis elegans'ta Dopamin Sinyalini Değerlendirmek için Yüzmeye Bağlı Felç, J. Vis. Uzm.(2019).

SWIP

NOT: AMPH ile tedavi edilen vahşi tip solucanlarda SWIP'yi değerlendirmenin manuel yöntemini açıklıyoruz. Ayrıca, daha önce Hardaway ve arkadaşları tarafından tanımlanan otomatik bir solucan izleyici ve bir izleme yazılımı kullanarak solucanların izlenmesini ve solucan kinetiğinin daha fazla analizini kısaca tartışıyoruz.

1. SWIP'yi test etmek için manuel yöntem
   1. 40 μL 200 mOsm/L sükroz çözeltisini, 0.5 mM AMPH ile veya 0.5 mM AMPH olmadan bir cam spot plakaya koyun. Stereoskopun altında, bir kirpik veya platin pena ile 8-10 geç L4 aşama solucanı toplayın ve solucanlar penadan ayrılıp solüsyona girene kadar penayı solüsyonu içeren plakaya daldırın. Kuyuya toplanan solucanların sayısını not edin, zamanlayıcıyı başlatın, her dakika işaretinde SWIP sergileyen solucanların sayısını gözlemleyin ve kaydedin.
   2. Ham verileri bir elektronik tabloya kopyalayın ve her dakika felç olan solucan sayısını test boyunca test edilen toplam solucan sayısına bölerek felç olan solucanların yüzdesini hesaplayın ve 100 ile çarpın. Yüzde değerlerini herhangi bir grafik ve istatistik yazılımına kopyalayın ve XY grafik biçimini kullanarak verileri Y ekseninde yüzde değerleri ve X ekseninde zaman ile çizin.
   3. Kontrol, AMPH grupları ve tedavi süresi arasında istatistiksel anlamlılığı test etmek için iki yönlü ANOVA ve ardından post-hoc analiz (örneğin, Bonferroni son testi) gerçekleştirin.
2. SWIP'in otomatik analizi
   1. Bir kerede tek bir solucan üzerinde otomatik analiz gerçekleştirin. Kamerayı kurma protokolü, solucan izleme yazılımı ve izleme yazılımı analizini çalıştırmak için komut dosyası Hardaway ve ark.
   2. Kısaca, bölüm 1.1.2'deki manuel yöntemde açıklandığı gibi, tek bir geç L4 aşaması hermafroditi bir kirpik penası kullanarak bir cam spot plakaya yerleştirin. Aynı anda bir solucanın yüzme videolarını kaydedin ve vücut kıvrımlarının sıklığını hesaplamak için solucan izleme yazılımını kullanın.
   3. Solucan dövme sıklığını elde etmek ve solucan dövme verilerinden ısı haritaları oluşturmak için izleme yazılımıyla birlikte verilen komut dosyasını izleyin.