Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
2.6K görüntüleme
⸱
30 Nisan 2023
Kaynak: Groh, N. et al. Caenorhabditis elegans'ta Yaşla Birlikte Doğal Protein Agregasyonundaki Değişiklikleri İnceleme Yöntemleri. J. Vis. Uzm.(2017).
RNAi, C. elegans araştırmacılarının kullanabileceği güçlü bir genetik araçtır. Bu video, sıvı kültür koşullarını kullanarak plaka beslemeden daha fazla solucanı RNAi ile tedavi etmek için bir yöntem sunmaktadır.
Bu protokol, Groh ve ark. Caenorhabditis elegans'ta Yaşla Birlikte Doğal Protein Agregasyonundaki Değişiklikleri İnceleme Yöntemleri, J. Vis. Exp. (2017).
1. İlgilenilen bir geni hedefleyen RNAi'ye maruz kalan genç ve yaşlı hayvanları toplamak için gonadsız hayvanların sıvı kültürü
NOT: Bazı genlerin RNAi'ye tepkisi, daha önce açıklandığı gibi sıcaklığa bağlı olabilir. RNAi'ye bir alternatif olarak, bir mutant gen
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Fernbach kültür şişesi | Corning | 4425-2XL | Pyrex, Kapasite 2.800 ml, 3 bölme girintili | evet |
| Membran Vidalı Kapak | Schott | 1E+06 | GL45 | evet |
| Somunlama Karıştırıcı | VWR (VWR) | 444-0148 | evet | |
| Ayırıcı huni | Nalgene Belediyesi | 4300-1000 | Kapasite 1.000 ml | Hayır |
| 1 ml şırınga | BD Plastipak | 3E+05 | Hayır | |
| Gri iğne, 27 G x 1/2 ", 0,4 mm x 13 mm | BD Mikromızrak 3 | 3E+05 | Hayır | |
| Membran filtreler 0,025 μM | Kırlangıç | VSWP04700 | Hayır | |
| pH şeridi | Machery-Nagel | 92110 | pH Düzeltme 0-14 | Hayır |
| Proteaz İnhibitörü Kokteyli | Roche | 5E+09 | Komple Mini EDTA içermeyen tabletler | Hayır |
| Okoksinol-9 | Uygulama | A1388 | Triton X-100 | Hayır |
| 4-Morfolineetansülfonik asit (MES) | Sigma-Aldrich | M1317 | Hayır | |
| Nonilfenilpolietilenglikol | Uygulama | A1694 | Nonidet P40 (NP40) | Hayır |
| DNaseI | Roche | 5E+09 | rekombinant, RNaz içermez | Hayır |
| RNaseA (RNaseA) | Promega | A7973 | çözüm | Hayır |
| Toplam protein lekesi boyama | Termo Balıkçı | S11791 Serisi | Sypro Ruby protein leke lekesi | Hayır |
| Toplam protein jel boyama | Termo Balıkçı | S12001 Serisi | Sypro Ruby protein jel boyası | Hayır |
| TCEP (tris (2-karboksietil) fosfin hidroklorür) | Serva | 36970 | Hayır | |
| İyodoasetamid | Serva | 26710 | Hayır | |
| Amonyumbikarbonat | Sigma-Aldrich | 9830 | Hayır | |
| Sıralama Sınıfı Modifiye Tripsin | Promega | V5111 | Hayır | |
| Bağıl ve mutlak kantitasyon için izobarik etiketler | Sciex (Bilim) | 4E+06 | iTRAQ Reaktifler Çoklama Kiti | Hayır |
| Santrifüj Avanti J-26XP | Beckmann Coulter · | 4E+05 | evet | |
| Ultrasantrifüj Optima Max-XP | Beckmann Coulter · | 4E+05 | Hayır | |
| Santrifüj 5424R | Eppendorf Belediyesi | 5E+09 | evet | |
| Santrifüj 5702 | Eppendorf Belediyesi | 6E+09 | evet | |
| Santrifüj Megafüj 40R | Termo Bilimsel | 8E+07 | Hayır | |
| Yoğunlaştırıcı Artı | Eppendorf Belediyesi | 5E+09 | Santrifüj evaporatör | Hayır |
| Floresan stereo mikroskop M165 FC | Leica Belediyesi | Planapo 2.0x hedefi ile | Hayır | |
| Diseksiyon mikroskobu | Leica Belediyesi | Leica S6E | evet | |
| Yüksek büyütme mikroskobu Zeiss Axio Observer Z1 | Zeiss | PlanAPOCHROMAT 20x objektif ve Zeiss Axio Cam MRm ile | Hayır | |
| yazılım | Hayır | |||
| Görüntü analiz yazılımı | ResimJ | Hayır | ||
| Kütle spektrometresi verilerinin analizi | Protein Arayıcısı | http://prospector.ucsf.edu/prospector/mshome.htm | Hayır | |
| E.coli suşları | ||||
| OP50 | CGC (Cesaret Gösteri | |||
| RNAi bakterileri | ||||
| L4440 | Julie Ahringer RNAi kütüphanesi | |||
| C. elegans mutantları | ||||
| CF2253 | CGC, suş adı: EJ1158 | Genotip: gon-2 (q388) | ||
| C. elegans transgenikleri | ||||
| DCD214 | Della David'in DZNE Tübingen'deki laboratuvarı | Genotip: N2; uqIs24[Pmyo-2::tagrfp::p ab-1] | ||
| DCD215 | Della David'in DZNE Tübingen'deki laboratuvarı | Genotip: daf-2(e1370) III; uqIs24[Pmyo-2::tagrfp::p ab-1] | ||
