Method Article

Yumurtlama Deneyi: C. elegans'ın Yumurtlama Davranışını Ölçmek İçin Bir Yöntem

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Lee, S. Y. ve Kang, K. Kimyasalların Caenorhabditis elegans'ın Büyümesi ve Üremesi Üzerindeki Etkisinin Ölçülmesi. J. Vis. Uzm. (2017).

C. elegans yumurtlama davranışı, gelişimsel, üreme ve anatomik çalışmalarda önemli bilgiler sağlayabilir. Bu video, bir yumurtlama testinin önemli adımlarını tanıtır ve bir ilacın üreme toksisitesi açısından test edildiği örnek bir deneyi gösterir.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Lee ve Kang, Kimyasalların Caenorhabditis elegans'ın Büyümesi ve Üremesi Üzerindeki Etkisinin Ölçülmesi, J. Vis. Uzm. (2017).

>1. C. elegans Yumurtlama Testi

  1. Yaşa göre senkronize edilmiş yumurtaları, DMSO veya etoposid içeren NGM plakası üzerinde 64 saat (ilk doğumdan önce) 20 ° C'de genç yetişkin aşamasına kadar kuluçkaya yatırın.
    NOT: Büyüme ölçüm deneylerindeki solucanların kullanılması isteğe bağlıdır. Büyüme ölçümü ve yumurtlama tahlilinin birlikte yapılması uygundur.
  2. 5 yetişkin solucanı kimyasallar içermeyen yeni NGM plakalarına (koşul 1, yumurtadan genç yetişkin aşamasına kadar belirli bir süre içinde kimyasal işlem) veya aynı kimyasal ön işlemi içeren yeni NGM plakasına (koşul 2, genel deney süresi boyunca kimyasallara sürekli maruz kalma) aktarın ve ardından 24 saat boyunca inkübe < > NOT: Her tedavi için 3-5 NGM plakası kullanılarak replikaların yapılması önerilir; Bu kopyalar istatistiksel analiz için kullanılabilir.
  3. Yukarıda anlatıldığı gibi yeni NGM plakasına aktarın ve her gün yumurta sayısını sayın. Sürünen, ölen ve içten yumurtadan çıkan solucanları sayın.
  4. Solucanlar genellikle 5 gün içinde yumurta bırakmayana kadar bu adımları tekrarlayın.
  5. Her bir plakadan solucan başına bırakılan yumurta sayısını hesaplayın ve yumurtlanan toplam yumurta sayısını belirlemek için bu değerleri 5 gün boyunca her gün toplayın.
    NOT: Sürünerek çıkan ve dahili olarak yumurtadan çıkan solucanların sayısını hesaplamadan çıkarın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Caenorhabditis elegans N2Caenorhabditis Genetik Merkezi (CGC)Vahşi tür
Dimetil sülfoksitSigma, Amerika Birleşik DevletleriD2650
Escherichia coli OP50Caenorhabditis Genetik Merkezi (CGC)
EtoposideSigma, Amerika Birleşik DevletleriE1383
35 × 10 mm Petri kabıSPL Yaşam Bilimleri, Güney Kore10035
Stereo mikroskopNikon, JaponyaSMZ800N
Serisi Serisi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Egg Laying AssayC elegansReproductive ToxicityNematode Growth MediaDevelopmentally Synchronized EggsHeat Killed Bacterial FoodEtoposide TreatmentEgg Counting ProtocolYoung Adult WormsNGM Plates

Related Articles