Yumurtlama Deneyi: C. elegans'ın Yumurtlama Davranışını Ölçmek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Lee, S. Y. ve Kang, K. Kimyasalların Caenorhabditis elegans'ın Büyümesi ve Üremesi Üzerindeki Etkisinin Ölçülmesi. J. Vis. Uzm. (2017).

C. elegans yumurtlama davranışı, gelişimsel, üreme ve anatomik çalışmalarda önemli bilgiler sağlayabilir. Bu video, bir yumurtlama testinin önemli adımlarını tanıtır ve bir ilacın üreme toksisitesi açısından test edildiği örnek bir deneyi gösterir.

Protokol

Lee ve Kang, Kimyasalların Caenorhabditis elegans'ın Büyümesi ve Üremesi Üzerindeki Etkisinin Ölçülmesi, J. Vis. Uzm. (2017).

>1. C. elegans Yumurtlama Testi

1. Yaşa göre senkronize edilmiş yumurtaları, DMSO veya etoposid içeren NGM plakası üzerinde 64 saat (ilk doğumdan önce) 20 ° C'de genç yetişkin aşamasına kadar kuluçkaya yatırın.
   NOT: Büyüme ölçüm deneylerindeki solucanların kullanılması isteğe bağlıdır. Büyüme ölçümü ve yumurtlama tahlilinin birlikte yapılması uygundur.
2. 5 yetişkin solucanı kimyasallar içermeyen yeni NGM plakalarına (koşul 1, yumurtadan genç yetişkin aşamasına kadar belirli bir süre içinde kimyasal işlem) veya aynı kimyasal ön işlemi içeren yeni NGM plakasına (koşul 2, genel deney süresi boyunca kimyasallara sürekli maruz kalma) aktarın ve ardından 24 saat boyunca inkübe < > NOT: Her tedavi için 3-5 NGM plakası kullanılarak replikaların yapılması önerilir; Bu kopyalar istatistiksel analiz için kullanılabilir.
3. Yukarıda anlatıldığı gibi yeni NGM plakasına aktarın ve her gün yumurta sayısını sayın. Sürünen, ölen ve içten yumurtadan çıkan solucanları sayın.
4. Solucanlar genellikle 5 gün içinde yumurta bırakmayana kadar bu adımları tekrarlayın.
5. Her bir plakadan solucan başına bırakılan yumurta sayısını hesaplayın ve yumurtlanan toplam yumurta sayısını belirlemek için bu değerleri 5 gün boyunca her gün toplayın.
   NOT: Sürünerek çıkan ve dahili olarak yumurtadan çıkan solucanların sayısını hesaplamadan çıkarın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetik Merkezi (CGC)		Vahşi tür
Dimetil sülfoksit	Sigma, Amerika Birleşik Devletleri	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetik Merkezi (CGC)
Etoposide	Sigma, Amerika Birleşik Devletleri	E1383
35 × 10 mm Petri kabı	SPL Yaşam Bilimleri, Güney Kore	10035
Stereo mikroskop	Nikon, Japonya	SMZ800N

Serisi Serisi