Kalsiyum Görüntüleme: Canlı C. elegans'ta Nöral Aktiviteyi Görselleştirmek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Turek, M. et al. Caenorhabditis elegans'ın Uzun Süreli Kalsiyum Görüntülemesi için Agarozlu Mikro Odalar.J. Vis. Uzm.(2015).

Bu video, kalsiyum görüntülemenin arkasındaki kavramları tanıtır ve kalıplanmış agaroz kuyularında bulunan solucanların hızlandırılmış görüntülemesi için örnek bir protokol içerir.

Protokol

Bu protokol, Turek ve ark., Caenorhabditis elegans'ın Uzun Süreli Kalsiyum Görüntülemesi için Agaroz Mikro Odaları, J. Vis. Exp. (2015).

1. Kalsiyum Görüntüleme

1. HBR16 (goeIs5[pnmr-1::SL1-GCaMP3.35-SL2::unc-54-3'UTR, unc-119(+)]) gibi genetik olarak kodlanmış kalsiyum sensörlerini ifade eden transgenik suşları kullanın.
2. Geniş alanlı epifloresan için donatılmış bir bileşik mikroskop kullanın. EMCCD kameranın TTL çıkışını LED'in TTL girişine bağlayın, böylece kamera her kare kaydettiğinde örnek aydınlatılır. Yaklaşık 5 msn'lik bir maruz kalma süresi kullanın. EM kazancını 50 - 300 aralığında kullanın.
3. Her bir solucanın önce DIC ile 20 saniye boyunca, ardından GCaMP'yi kaydetmek için GFP floresansı ile 20 saniye boyunca her 15 - 30 dakikada bir görüntülendiği 24 saat boyunca çalışan bir seri film belirtin ve ardından ifade seviyelerini kontrol etmek için mKate2 sinyalinin son bir görüntüsünü alın. Her seri çekim sırasında 2/sn'lik bir kare hızı kullanın.
4. Görsel veri incelemesi için, floresan yoğunluğundaki küçük değişikliklerin görünürlüğünü artırmak için sahte bir renk haritası kullanın. Floresan verilerini, F, floresanın ortalama temel değeri olacak şekilde ΔF/F olarak çizin. Kalsiyum veri analizinin ayrıntılı bir açıklaması literatürde bulunabilir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
LED sistemi	CoolLED	pE-2
Bileşik mikroskop	Nikon	bağlamak
EMCCD kamera	Andor	iXon 897	artık iXon Ultra 897 olarak satılıyor
Mikroskop için Z aşaması	Önce	Nano Tarama Z
Mikroskop için X-Y aşaması	Önce	Proscan III
Kırmızı ışık filtresi	Chroma	ET660/50m
35 mm Petri kabı	doğan	Falcon Tek Kullanımlık Petri Kapları, Steril, Corning

Serisi