$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Bu protokol, Turek ve ark., Caenorhabditis elegans'ın Uzun Süreli Kalsiyum Görüntülemesi için Agaroz Mikro Odaları, J. Vis. Exp. (2015).
1. Kalsiyum Görüntüleme
- HBR16 (goeIs5[pnmr-1::SL1-GCaMP3.35-SL2::unc-54-3'UTR, unc-119(+)]) gibi genetik olarak kodlanmış kalsiyum sensörlerini ifade eden transgenik suşları kullanın.
- Geniş alanlı epifloresan için donatılmış bir bileşik mikroskop kullanın. EMCCD kameranın TTL çıkışını LED'in TTL girişine bağlayın, böylece kamera her kare kaydettiğinde örnek aydınlatılır. Yaklaşık 5 msn'lik bir maruz kalma süresi kullanın. EM kazancını 50 - 300 aralığında kullanın.
- Her bir solucanın önce DIC ile 20 saniye boyunca, ardından GCaMP'yi kaydetmek için GFP floresansı ile 20 saniye boyunca her 15 - 30 dakikada bir görüntülendiği 24 saat boyunca çalışan bir seri film belirtin ve ardından ifade seviyelerini kontrol etmek için mKate2 sinyalinin son bir görüntüsünü alın. Her seri çekim sırasında 2/sn'lik bir kare hızı kullanın.
- Görsel veri incelemesi için, floresan yoğunluğundaki küçük değişikliklerin görünürlüğünü artırmak için sahte bir renk haritası kullanın. Floresan verilerini, F, floresanın ortalama temel değeri olacak şekilde ΔF/F olarak çizin. Kalsiyum veri analizinin ayrıntılı bir açıklaması literatürde bulunabilir.