Yeni Tank Dalış Deneyi: Zebra Balıklarında Doğuştan Gelen Stres Tepkilerini İncelemek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Chin J.S.R., et al. Zebra Balıklarında Doğuştan Gelen Stresi İncelemeye Yönelik Davranışsal Yaklaşımlar. J. Vis. Uzm. (2019)

Makale, zebra balıklarında stresi değerlendirmek için davranışsal bir yöntemi açıklamaktadır. Strese yanıt olarak, zebra balığı stres giderilene kadar bir tankın dibinde yüzmeye meyillidir. Örnek protokol, testi gerçekleştirmek için adım adım yöntemi açıklar.

Protokol

1. Yeni tank test kurulumu

1. Balık sistemi suyu ile önceden doldurulmuş 250 mL'lik bir beher ve en az iki tutma tankı hazırlayın.
2. Test sabahı, her deney koşulu için kullanılacak en az 10 adet ergin zebra balığını (kontroller ve deney yapan yetişkinler) balık tesisinden bir bekletme tankına aktarın, davranış odasına aktarın ve en az bir saat alışmalarına izin verin.
   not: Deneyden önce bir güç analizi yapılmalıdır, ancak bizim elimizde, istatistiksel anlamlılığı tespit etmek için genellikle n = 10 yeterlidir. Ayrıca, tutma tankı litre su başına en fazla beş kişi içermelidir. Zebra balığı yetişkinlerinin yeni bir tanktan sonraki 30 dakika içinde alıştıkları gösterildiğinden, bir saatlik bir alışma yeterlidir. Ayrıca, davranışsal ritimler sirkadiyen süreçlerden etkilenir ve bu nedenle farklı günlerde yapılan deneysel tekrarlar aynı saatler içinde yapılmalıdır. Tüm deneyleri genellikle 11:00 ile 18:00 saatleri arasında gerçekleştiririz.
3. Tankları, hayvanların durumu veya genotipi deneyciye kör olacak şekilde etiketleyin.
   not: Deneyler, tankları bir harf veya sayı sistemi kullanarak etiketleyerek deneyciye kolayca kör edilebilir (yani, bir tank 'A', diğeri 'B' vb. Etiketlenir). Deneylerde yer almayan bir taraf, tankları böyle bir sistemle etiketler ve analiz sonrası tamamlanana kadar deneycinin kimliklerini maskeler.
4. Bir ağ kullanarak, adım 1.1'den itibaren önceden doldurulmuş behere tek bir yetişkini nazikçe yerleştirin. Yetişkin balığın beherde 10 dakika alışmasına izin verin.
   not: Yetişkinin cinsiyetini kaydedin, çünkü cinsiyete özgü farklılıkları aramak için analiz sonrası önemli olabilir.
5. Beherde alıştırıldıktan sonra, suyu ve yetişkini beherden nazikçe dökerek balığı yeni tanka (aşağıdaki kurulum ayrıntıları) sokun.
   not: Bu bölümdeki adımlar, yeni tank tahlilinin kurulumunu açıklar. Nihai ürünün bir diyagramı Şekil 1B'de verilmiştir.
   1. Yeni tankı masanın ortasına yerleştirin.
   2. Kızılötesi ışıkları tankın arkasına yerleştirin ve beyaz akrilik levhayı veya difüzör ekranını tank ile LED ışık kaynağı arasına yerleştirin.
   3. Difüzörü, LED'lerden gelen ışığı maksimum düzeyde yayacak ve ışığın yoğunluğu yeni tankı aydınlatmak için yeterli olacak şekilde yerleştirin. Kart ışık kaynağına ne kadar yakınsa, ışıklar o kadar parlak olur, ancak o kadar az yayılır. Buna karşılık, difüzör kartını ışık kaynağından uzağa yerleştirmek ışık yoğunluğunu azaltacak, ancak ışığı daha iyi yayacaktır.
   4. Yeni tankın yaklaşık dörtte üçünü balık sistemi suyu ile doldurun.
      not: Sistem suyu, musluk suyunun ters ozmozu kullanılarak üretilir, ardından iletkenlik 900 ± 100 μS'ye, pH nötr (7,2) ve sıcaklık 27 ± 1 °C olacak şekilde dozajlanır.
   5. Kamerayı kamera standına takın ve kamerayı bilgisayara bağlayın. Video toplama yazılımını açın ve kamerayı tankın ön tarafına bakacak şekilde ayarlayın ve yeni tankın tamamının görülebildiğinden ve videoda gizlenmiş alan olmadığından emin olun. Depoyu ve kızılötesi ışıkları, kameradan bakıldığında tankın her yerinde yeterli ve eşit aydınlatma olacak şekilde ayarlayın.
      not: Deneylere devam etmeden önce, bir balığın videosunun çekildiği ve izlemenin yapıldığı bir deneme çalışması yapmak genellikle yararlı olabilir. Bu, kurulumun davranış deneyi için yeterli olmasını sağlayacaktır.
6. Yetişkini yeni tanka soktuktan sonra kamera kaydını başlatın ve balığa daha fazla sıkıntı vermemek için kurulumdan uzaklaşın.
7. Kayıt bittikten sonra, bireyi yeni tanktan çıkarın ve yeni bir tutma tankına yerleştirin.
   not: Aynı kişiler üzerinde tekrarlanan testleri önlemek için adım 1.2'dekinden farklı bir tutma tankı kullanılmalıdır.

Sonuçlar

Şekil 1. Yeni tank kurulumunun şeması.(A) 1.8 L trapez novel tankının, tankın kayıt tarafından görüldüğü gibi boyutları. (B) İnsan müdahalesini en aza indirmek için kullanılan kızılötesi ışıkların, kameranın ve bariyerlerin konumları dahil olmak üzere kurulumun şeması.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
kamera			Edmund Optics'ten lensli Point Grey Grasshopper3 USB kamera kullanıyoruz.
Kızılötesi filtre	Edmund Optik
Video Edinme Programı			Virtualdub veya FlyCapture gibi programları kullanın, çünkü çekim kare hızı ayarlanabilir.
Kızılötesi LED ışıklar
Tahlil tankı	Su ürünleri yetiştiriciliği	Parça numarası ZT180	Boyut: M3 1.8 litre
Stand ve kelepçe veya kamera için standart tripod
250 mL beher
İzleme yazılımı			Noldus Bilgi Teknolojisi'nden Ethovision XT 13 kullanıyoruz