Yetişkin Zebra Balığı Bağırsak Diseksiyonu: Bileşik Emilimini Analiz Etmek İçin Bir Teknik

Özet

Kaynak: Jie J. ve diğerleri, Yetişkin Zebra Balıklarının Oral Entübasyonu: Biyoaktif Bileşiklerin Bağırsak Alımını Değerlendirmek İçin Bir Model. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu videoda, biyoaktif bileşiklerin bağırsak alımını değerlendirmek için bağırsağı izole etme tekniği açıklanmaktadır. Bu örnekte, immünostimülanların alımını analiz etmek için bağırsağı yetişkin bir zebra balığından izole edeceğiz.

Protokol

1. Zebra Balığı Bağırsak Diseksiyonu

1. Entübasyondan belirli bir süre sonra (ör.5 saat ve/veya 24 saat), balığı ötenazi için 300 mg / L etil 3-aminobenzoat metansülfonat (MS-222) çözeltisine bir ağ kullanarak yerleştirin. Operkulumun hareket etmeyi bıraktığından ve kuyruk kıstırma refleksi olmadığından emin olun. Normalde beş dakika yeterlidir.
2. Ötenazi yapılmış hayvanı bir ağ ile alın ve bir filtre kağıdına yerleştirin.
   not: Filtre kağıdı, bağırsak boyunca yapışkan dokuyu çıkarmak için çok kullanışlıdır.
3. Keskin diseksiyon makası kullanarak anüsten operkuluma yarım daire şeklinde bir kesi yapın ve ince cımbız kullanarak kesi açın. Bağırsağın her iki ucunu kesin, tüm iç organları çıkarın ve filtre kağıdına yerleştirin.
   Dikkat: Hücre metabolizmasını ve ölümünü azaltmak için hızlı çalışın.
   not: Alternatif olarak, PBS'deki ve buzdaki yapışkan dokuyu çıkarın.
4. Bağırsağı iç organlardan ayırın, oryantasyonunu koruduğunuzdan emin olun (ön ila arka bağırsak segmenti) ve gerin. Genellikle bağırsağın ön segmenti arka segmentten daha geniştir. Diseksiyon yaparken bağırsağın tamamını almaya özen gösterin.
   not: Arka uç küçük balıklarda oldukça ince ve kırılgandır ve özellikle hayvanlarda <0.7 g kırılabilir.
5. Yapışkan dokuyu bağırsaktan ayırmak için bağırsağı cımbızla filtre kağıdının üzerine yuvarlayın.
6. Bağırsağı çeşitli aşağı akış analizleri için hazırlamaya devam edin

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	toz
10 adet PBS	Sigma Aldrich	P5493 Serisi
Filtre kağıdı	Filtre Laboratuvarı	RM14034252

Serisi · Serisi ·