Birincil Mamosferlerin Üretimi: Hücre Potansiyelini Belirlemek İçin Bir Teknik

Özet

Kaynak: Lombardo ve diğerleri, İnsan Meme Kanseri Dokularından ve Hücre Hatlarından Mamosfer Oluşumu Testi. J. Vis. Uzm. (2015).

Bu videoda, meme kanseri hücre hatlarından kanser kök hücrelerinin izole edilmesi anlatılmaktadır. Bu kanser kök hücrelerini, kendini yenilemeyi değerlendirmek ve küre oluşturma verimliliğini hesaplamak için birincil mamosferler oluşturmak üzere kültüre ediyoruz ve farklı tohumlama yoğunlukları arasında karşılaştırmaya izin veriyoruz.

Protokol

1. İnsan Meme Kanseri Hücre Hatlarından Primer Mamosferlerin Üretilmesi

NOT: Steril bir kültür başlığı altında aşağıdaki adımları gerçekleştirin.

1. 2 mM L-glutamin, 100 U/ml penisilin, 100 U/ml streptomisin ile takviye edilmiş DMEM/F12 içeren Mamosfer Ortamı hazırlayın. Kullanmadan hemen önce 20 ng/ml rekombinant insan epidermal büyüme faktörü (EGF; Sigma), 10 ng/ml rekombinant insan temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF; Ar-Ge Sistemleri) ve 1x B27 eki.
2. Yapışkan MCF-7 veya MDA-MB-231 hücreleri (veya seçtiğiniz bir meme kanseri hücre hattı; %70-80 birleşme) içeren şişeden aspire edin, 1x PBS'de iki kez y....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
DMEM/F12	Fransa	CC-3151
2 mM L-glutamin	Sigma Aldrich	G8540
100 U/ml Penisilin ve Streptomisin	Sigma Aldrich	P4083 Serisi
20 ng/ml Rekombinant insan epidermal büyüme faktörü (EGF)	Sigma Aldrich	E9644
20 ng/ml Rekombinant insan temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF)	Ar-Ge sistemleri	233-FB-025
1x B27 takviyesi	Canlandırıcı	17504-044
Fosfat tamponlu salin (PBS)	Termo Bilimsel	12399902
% 0.5 tripsin/% 0.2 EDTA	Sigma Aldrich	59418C
Fetal baldır serumu	First Link UK	02-00-850
Tripan mavisi	Sigma Aldrich	93595
Düşük ataşmanlı 6 oyuklu plakalar	Corning	CLS3814

Serisi Serisi · Serisi · · Serisi · ·