İntraduktal Enjeksiyon: Fare Meme Bezinin Kanallarına Enjeksiyon Karışımının Verilmesi

Özet

Kaynak: Xiang, D., et al. Fare Meme Bezine Cre-eksprese Eden Adenovirüsün İntraduktal Enjeksiyonu Yoluyla Meme Kanserinin Modellenmesi. J. Vis. Deneyim (2019).

Bu videoda, fare meme bezlerinin kanallarına enjeksiyon karışımı verdiğimiz bir intraduktal enjeksiyon tekniği açıklanmaktadır.

Protokol

1. İntraduktal enjeksiyon

1. Cerrahi prosedür boyunca aseptik teknikler kullanın.
2. İki dördüncü kasık MG'si arasında cilt üzerinde ~ 1 cm uzunluğunda bir kesi yeri açın (Şekil 1). Meme duktal ağacını görselleştirmek için deri flebini (MG ile) parietal peritondan dikkatlice ayırın.
3. Meme ucunu Watchmaker'ın forsepsleriyle dikkatlice tutun ve bir mikro diseksiyon makası kullanarak yakındaki herhangi bir deriyi kesmeden dış meme ucunu çıkarın.
4. 33 G metal göbek iğnesi takılı 25 μL'lik bir Hamilton şırıngaya ~3-5 μL Ad-Cre enjeksiyon karışımı yükleyin. Karışıma dahil edilen mavi boyaya dayalı olarak şırıngadaki enjeksiyon karışımının hacmini tahmin edin.
   not: Daha küçük bir hacim kullanın (ör., 3-4 haftalık dişilerin MG'lerine enjekte ederken 3 μL) ve daha büyük bir hacim (ör., 10 μL) emziren kadınların MG'lerine enjekte ederken.
5. İnce kavisli bir cımbızla cilt kanadının kenarını nazikçe tutun ve Ad-Cre enjeksiyon karışımını yavaşça meme ucuna enjekte edin, bu arada mavi boyanın meme duktal ağacına yayılmasını izleyin. Kanal lümenine zarar vermemek için enjeksiyon hızını mümkün olduğunca düşük tutun.
   not: Enjekte edilen sıvının (birlikte verilen bromofenol mavisi boya ile gösterildiği gibi) stromal bölmeye sızmadan tüm duktal ağaç boyunca yayılması, başarılı bir intraduktal enjeksiyonu gösterir.
6. Enjekte edilen sıvının herhangi bir sızıntısını önlemek için iğneyi meme ucundan yavaşça çekin.
7. MG'nin distal tarafını (yani meme ucundan uzakta) veya enjekte edilen meme ucunun çevresini inceleyin. Şişme mavi boyanın (yani, yakındaki stroma'ya yayılan boya) başarılı bir intraduktal enjeksiyondan ziyade bir meme yağ yastığı enjeksiyonunu gösterdiğini unutmayın.
8. Derideki cerrahi yaraları (1.2'den itibaren) yara klipsleri ile kapatın.

2. Ameliyat sonrası bakım

1. Fareyi anesteziden çıkarın ve iyileşme için temiz bir kafes içindeki bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin.
2. Ameliyattan 24 saat sonra tekrar 5 mg / kg'da deri altına meloksikam uygulayın.
3. Hayvanın genel durumunu izleyin ve 5 gün boyunca insizyon bölgesinde enfeksiyon belirtileri arayın.
4. Yara klipsleri ameliyattan ~ 7-10 gün sonra çıkarılır.

Sonuçlar

Şekil 1: Ad-Cre virüsünün bir MG'ye intraductal enjeksiyonunun şematik diyagramı.(A) İki dördüncü MG arasındaki orta hatta insizyon yeri. (B) Ad-Cre'nin mavi bir boya ile (daha iyi görselleştirme için) dördüncü MG'lerden birine intraductal enjeksiyonu. (C) Derideki insizyonun yara klipsleri ile kapatılması

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
33 gauge iğne	Hamilton	7803-05	Nokta Stili 3 Künt
7mm Refleks Klips	Braintree Bilimsel	RF7 CS (İngilizce
Adenovirüs, Ad-K5-Cre	Iowa Üniversitesi Viral Vektör Çekirdeği	Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)
Adenovirüs, Ad-K8-Cre	Iowa Üniversitesi Viral Vektör Çekirdeği	Ad5mK8-nlsCre
Bromofenol Mavisi	Sigma-Aldrich	B0126-25G
Hamilton şırınga	Hamilton	7636-01	0.025 mL
Mikro diseksiyon makası	Pentair (Beşiktaş)	9 DK.	Saatçinin Forsepsleri
Mikro diseksiyon cımbız	Dumont	M5

) Gazetesi Serisi