Hindistan Mürekkep Şişirme: Tümör Nodüllerini Görselleştirmek İçin Bir Boyama Yöntemi

Özet

Kaynak: Paschall, A. V. et al. Spontan Meme Kanseri Metastazının Ortotopik Fare Modeli. J. Vis. Exp. (2016).

Bu videoda, tümör taşıyan fare akciğerlerindeki tümör nodüllerini ölçmek için bir boyama yöntemi olan Hindistan mürekkep şişirme yöntemi açıklanmaktadır. Boyamadan sonra, akciğerlerdeki tümör nodüllerini gözlemlemek için akciğerler Fekete'nin solüsyonuna sabitlenir.

Protokol

1. Tümör Taşıyan Akciğerlerin Hindistan Mürekkebi Şişirilmesi Kullanılarak Akciğer Metastazlarının Doğrulanması

NOT: Lusiferaz canlı tümör görüntüleme sonuçlarını doğrulamak için, tümör nodüllerini ölçmek için tümör taşıyan fare akciğerlerinin Hindistan mürekkebi şişirme işlemini gerçekleştirin. 4T1 hücreleri diğer organ ve dokulara da metastaz yapar (Şekil 1) ve bu nedenle gerekirse tümör metastazını doğrulamak için bu organların histolojik incelemesi yapılmalıdır. Bu protokolde örnek olarak akciğer metastazı kullanılır.

1. Ötenazi için fareleri mevcut ev kafeslerinde tutun. Diğer hayvanlarla birlikte barındırıldığında, ötenazi yapılmayan fareleri farklı bir kafese yerleştirin.
2. Kafes filtresinin üst kısmını çıkarın ve CO2 filtre üst kısmı ile değiştirin. CO2 filtresinin üst kısmına bağlı olan sıkıştırılmış CO2 gaz tüpünü (%100) açın. Akış hızını 2 L/dk'ya ayarlayın ve CO2'yi en az 10 dakika açık tutun. Fareler 10 dakikanın sonunda hala nefes alıyorsa, farelerin nefes almayı bırakmasından en az 1 dakika sonrasına kadar CO2'yi açık bırakın. CO2 silindiri kontrolünü ve akış ölçeri kapatın. 3 dakika daha bekleyin ve filtrenin üst kısmını çıkarın.
3. Kurban edilen fareyi polistiren bir tahtanın üzerine sırt üstü yatırın. Trakeaya engelsiz erişim sağlamak için bacakları sabitleyin. Farelere% 70 etanol püskürtün.
4. Bir makas kullanarak, farenin orta karın bölgesinin orta hattı boyunca göğüs kafesinden tükürük bezlerine doğru kesin. Trakeayı gözlemleyin. Trakeayı ortaya çıkarmak için trakeayı çevreleyen dokuları çıkarmak için forseps kullanın.
5. Soluk borusunun altına bir pipet ucu geçirin. Ucu bir elinizle tutarak, trakeayı nazikçe yukarı kaldırın ve vücuttan uzaklaştırın.
6. Fareyi 180° tutarak platformu döndürün. Hindistan Mürekkebini (%10 Hindistan mürekkebi ve %0.1 Amonyum Hidroksit) trakea yoluyla akciğerlere enjekte etmek için 1/2 CC 27 G 1/2 tüberkülin şırıngası kullanın. Güçlü bir direnç hissedilene kadar akciğerleri mürekkeple tamamen şişirin.
7. Soluk borusunu kesmek için bir makas kullanın. Fareyi tutmak için forseps kullanın ve akciğerlerin altına başka bir forseps seti yerleştirin ve akciğer loblarını fareden dışarı çekin. Akciğerleri su içeren bir beherde kısa bir süre durulayın.
8. Kimyasal bir çeker ocakta, akciğerleri 3 ml Fekete çözeltisi (%50 Etanol, %6 Formaldehit ve %3 buzlu asetik asit) içeren bir cam sintilasyon şişesine aktarın. Çözeltinin buharlaşmasını önlemek için şişeyi kapatın.
   not: Dokular Fekete'nin solüsyonunda süresiz olarak saklanabilir.
9. Birkaç dakika sonra, tümör nodüllerini siyah akciğerlerde beyaz noktalar olarak gözlemleyin (Şekil 1). Beyaz tümör nodülü gözlerle görülebilir. Akciğerleri çeker ocaktaki bir tabağa aktarın ve beyaz lekelerin sayısını sayın. Her beyaz nokta tek bir metastatik tümör nodülünü temsil eder.

Sonuçlar

Şekil 1. Hindistan Mürekkep Şişirme ile Akciğer Tümör Nodüllerinin Görselleştirilmesi. Tümör taşıyan farenin akciğeri Hindistan mürekkebi ile şişirildi ve Fekete'nin solüsyonuna sabitlendi. Beyaz noktalar akciğer metastazlarıdır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
9 mm Otomatik Klips Uygulayıcı	Becton Dickinson Birinci Basamak Teşhisi. Kıvılcımlar, MD	427630
Keskin Uçlu Diseksiyon Makası	balıkçı	8940
İnce Uçlu Forsepslerin Diseksiyonu	balıkçı	8875
% 70 Etanol	Ultrapure-usa.com
1/2 CC 27 G 1/2 tüberkülin şırınga	Becton Dickinson ve Co. NJ	305620

adet adet