Yöntem makalesi

CTC İmmünofloresan Testi: Dolaşımdaki Tümör Hücrelerini Karakterize Etmek İçin Bir Teknik

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Garcia, J., et al. Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanseri Hastalarından Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin İmmünofloresan ile Yarı Otomatik PD-L1 Karakterizasyonu ve Sayımı.J. Vis. Uzm.(2019)

Bu videoda, küçük hücreli dışı akciğer kanseri hasta örneklerinde dolaşımdaki tümör hücreleri üzerindeki biyobelirteçleri karakterize etmek için bir teknik olan Dolaşımdaki Tümör Hücreleri (CTC) İmmünofloresan testi açıklanmaktadır. Bu test, kemoterapi, radyasyon ve olası immünoterapi tedavilerine yanıtı yansıtabilen tümör ve bağışıklık tepkisinin dinamik değişikliklerini izlemek için kullanılabilir.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. İmmünofloresan Boyama

  1. Hemositometre tipi bir ızgara ile odacıklı bir slaytta mL başına hücre sayısını numaralandırın. Zenginleştirilmiş numuneyi% 0.2 bağlanma önleyici çözelti (Malzeme Tablosu) ile sitospin başına 100.000 hücre / 100 μL'ye ulaşan bir konsantrasyona seyreltin.
  2. 50 μL% 0.2 bağlanma önleyici solüsyon ile pamuk (Malzeme Tablosu) kullanarak numune odasının konturunu nemlendirin. Numune haznesine bir polilisin cam sürgü yerleştirin ve kapatın.
  3. 3 kat yukarı ve aşağı pipetleyerek bir ucu %0,2 bağlanma önleyici solüsyonla kaplayın. Zenginleştirilmiş numuneyi yeniden süspanse edin ve hücre solü....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Plüronik F-68 %10 Gibco (Gibco) 24040-032Bağlanma önleyici çözüm. Saklama koşulları: Oda sıcaklığı
EZ Hücre Hunileri ThermoFisher (Termo Balıkçı)A78710003Pamuklu numune odası. Saklama koşulları: Oda sıcaklığı
Shandon Cytopsin4 santrifüjThermoFisher (Termo Balıkçı) A78300003Özel santrifüj. Saklama koşulları: Oda sıcaklığı
Paraformaldehit %16ThermoFisher (Termo Balıkçı) 11490570Fiksasyon çözümü. Saklama koşulları: +4°C
Fosfat Tamponlu Tuzlu Su Ultra Saf Sınıf 1X - 1L1. Temel LaboratuvarBUF-2040-1X1LSaklama koşulları: Oda sıcaklığı
FcR engelleme Ajanı Miltenyi Biyotec130-059-901Saklama koşulları: +4°C
PD-L1 monoklonal antikoru (klon 29E2A3) - PhycoerythrinBiyo Efsane BLE329706 Saklama koşulları: +4°C
PanCK monoklonal antikoru (klon AE1/AE3) Alexa Fluor 488ThermoFisher (Termo Balıkçı)53-9003-80 Saklama koşulları: +4°C
CD45 monoklonal antikoru (klon HI30) Alexa Fluor 647Biyo Efsane BLE304020Saklama koşulları: +4°C
Floromount Sigma F4680Montaj çözümü. Saklama koşulları: Oda sıcaklığı
Petri KabıDutscher632180Saklama koşulları: Oda sıcaklığı
Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS)ÖzymeBE17-512FSaklama koşulları: +4°C
Polilisin slaytları ThermoFisher (Termo Balıkçı)J2800AMNZSaklama koşulları: Oda sıcaklığı
Silikon İzolatör Grace Biyo-Laboratuvarları 664270Saklama koşulları: Oda sıcaklığı
Steril Deiyonize Su – 100 mL1. Temel Laboratuvar CUS-4100-100ml Saklama koşulları: Oda sıcaklığı
Fetal Baldır Serumu (FCS)Gibco (Gibco)10270-106Saklama koşulları: +4°C
Serisi

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Sitosantrif gasyonFloresan MikroskobuPD L1 KarakterizasyonuK k H creli D Akci er KanseriH cre FiksasyonuAntikor aretlemePBS Y kamaMontaj Sol syonu

İlgili makaleler