Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
3K görüntülenme
⸱
30 Nisan 2023
Kaynak: Van den Bijgaart R.J.E. ve ark., Akciğer Metastazı ve Mikroçevresinin Ex vivo Canlı Görüntülemesi, J. Vis. Exp. (2016)
Bu videoda, şişirme için agaroz kullanarak kanser hücreleri ve stromal hücreler arasındaki etkileşimleri incelemek için akciğerleri ex vivo canlı görüntüleme için hazırlama yöntemi açıklanmaktadır. Örnek protokolde, canlı hücresel etkileşimleri gözlemlemeden önce agaroz şişirme prosedürü açıklanmaktadır.
Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Ex vivo Canlı Görüntüleme için Akciğerlerin Hazırlanması
>NOT: Akciğerlerdeki bağışıklık hücrelerinin gereksiz zorluklarını önlemek için mümkün olduğunca steril ve dikkatli çalışmaya çalışın.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Şekil 1. Canlı görüntüleme için akciğerlerin hazırlanması için protokol.(A) Farenin hazırlanmasından sonra trakeanın maruz kalması. (B) Kıkırdak halkalarına paralel olarak açıkta kalan trakeada yapılan küçük kesme. (C) 20 G iğne trakeaya 4-5 mm sokulur. (D) Akciğerlere 400 μl% 2 düşük erime sıcaklığında agaroz .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Anestezi | Na | Na | IACUC tarafından onaylanmış, anestezi ve/veya ötenazi için kullanılan anestezi |
| PBS, USP steril | Amresco A.Ş | K813-500ML | I.v. enjeksiyon için ultra saf kalite |
| 1 adet PBS | UCSF hücre kültürü tesisi | Na | |
| Strafor platformu | Na | Na | Diseksiyon tahtası olarak kullanılacaktır |
| İnce makas keskin | Güzel Bilim Araçları | 14060-11 | |
| 20 G x 1 iğne, kısa eğim | Bd | 305178 | |
| Forseps | Roboz Cerrahi Mağazası | RS-5135 | |
| İğnesiz 1 mL şırınga | Bd | 309659 | |
| Düşük erime sıcaklığında agaroz | Fransa | 50111 | 10 ml çözelti yapmak için, 0.2 g agaroz ağırlığında, 10 ml 1 x PBS'ye ekleyin ve çözünmesi için ısıtın. Agaroz oda sıcaklığında katılaşacaktır, bu nedenle şişirme için kullanılana kadar 37 ° C'lik bir su banyosunda tutun. |
| RPMI-1640 fenol kırmızısı içermeyen orta | Yaşam Teknolojileri | 11835-030 | |
| 24 kuyulu Görüntüleme plakası | E&K bilimsel | EK-42892 | |
| Cam kapaklı kızaklar, 15 mm | Balıkçı Bilimsel | 22-031-144 | |
| Dijital CO2 ve sıcaklık kontrolörü | Okolab Laboratuvarı | DGTCO2BX | http://www.oko-lab.com |
| İklim odası | Okolab Laboratuvarı | Na | http://www.oko-lab.com |
| Hücre Gözlemcisi eğirme diski konfokal mikroskop | Zeiss | Na | |
| hava | UCSF (Birleşik Devletler Bankası) | Na | |
| oksijen | UCSF (Birleşik Devletler Bankası) | Na | |
| karbondioksit | UCSF (Birleşik Devletler Bankası) | Na |
