İntrabronşiyal Doğum: Deneysel bir ajanı seçici olarak bir fare akciğerine uygulamak için bir teknik

Özet

Kaynak: Liao, S. et. al. Fare Akciğerinde Seçici Ajan Birikimini İyileştirmek için Doğrudan İntrabronşiyal Uygulama. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu videoda, deneysel bir ajanın distal sağ ve sol akciğere seçici olarak uygulanması için intrabronşiyal bir yaklaşım açıklanmaktadır. Öne çıkan protokolde, pulmoner fibroz için daha iyi bir model elde etmek için bleomisini intrabronşikal olarak bir fareye uygulayacağız.

Protokol

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Nonoperatif IB entübasyon ve doğum yaklaşımları

1. Distal sağ akciğerin selektif lober kanülasyonuna IB yaklaşımı
   1. İntratrakeal (IT) kanülasyon yaptıktan sonra (uzatılmış kateteri ağız boşluğu yoluyla trakeaya entübe etmek için baskın elinizi kullanın), plastik levhayı +30° döndürün (Şekil 1A).
   2. Kateterin göbeğini tutun ve fare orta hattına paralel olarak doğal bir şekilde yönlendirin, Tablo 1.
      'de açıklandığı gibi ağırlığa dayalı derinliklere uzatın. not: Bu derinliklerdeki dirence dikkat edilmelidir. Bu noktada, fare temsili sonuçlarda açıklandığı gibi hafifçe takipneik hale gelecektir. Deneyimli bir operatör için, girişimlerin yaklaşık% 90'ı sağ akciğeri başarılı bir şekilde kanüle edecektir (takipne not edilmiştir).
   3. Jel yükleme ucu ile 20 μL %0,3 Evans mavi boya (EBD, Malzeme Tablosuna bakınız) verin.
   4. Cam damlalığı kullanarak 1-2 alikot (her biri 0.1 mL) hava dağıtın.
      not: Bu, kalıntı EBD çözeltisinin (veya deneysel ajanların) kateterin içinden temizlenmesini sağlar.
   5. Kateteri geri çekin, ardından fare konumunu 30 saniye koruyun.
   6. Hayvanı, bilincini geri kazanana kadar ısınma battaniyesine yerleştirin. Kurtarma işlemi genellikle 2 dakika içinde tamamlanır.
2. Distal sol akciğerin selektif segmental kanülasyonuna IB yaklaşımı
   1. IT kanülasyonunu gerçekleştirdikten sonra (uzatılmış kateteri ağız boşluğu yoluyla trakeaya entübe etmek için baskın elinizi kullanın), plastik levhayı -74° döndürün (Şekil 1B).
   2. Kateterin göbeğini tutun ve kateteri sol ana gövde bronşuna ilerletmek için hafif bir basınç uygulayın, aynı zamanda hem aşağı (90°) hem de kitap ucuna doğru mütevazı bir basınç uygulayın. Tablo 1'de belirtilen derinliklerde, operatör sol akciğerin alt segmentleri devreye girerken direnci not etmelidir. Taşipne meydana gelirse, kateteri 20-25 mm pozisyonuna çekin ve tekrar deneyin.
   3. Sol alt akciğer segmentlerini kanüle ettikten sonra, ajan uygulaması için yerçekimi yardımına izin vermek için pozisyonda bir değişiklik gereklidir. Plastik levhayı -30° döndürün (Şekil 1B).
   4. Jel yükleme ucu ile 40 μL %0,3 EBD verin.
      not: Sol akciğerin sadece bir lobu olduğu için daha büyük hacimde ajan vermek mümkündür.
   5. Cam damlalıkları kullanarak 1-2 alikot (her biri 0.1–0.3 mL) hava dağıtın.
      not: Bu, kateterin içinden herhangi bir kalıntı EBD'nin (veya deneysel ajanların) temizlenmesini sağlar.
   6. Kateteri geri çekin, ardından fare konumunu 30 saniye koruyun.
   7. Hayvanı, bilincini geri kazanana kadar ısınma battaniyesine yerleştirin. Kurtarma işlemi genellikle 2 dakika içinde tamamlanır.

Sonuçlar

Şekil 1: Selektif sağ/sol akciğer lober kanülasyonu ve uygulaması için yaklaşım.(A) Sağ akciğeri hedeflemek için, plastik levha +30° döndürülür, bu da sağ ana gövde bronşunu seçici olarak kavrama kolaylığını artırır. Kateter, sağ taraflı lobları seçici olarak devreye sokmak için ilerletilir (Tablo 1'de önerilen mesafelere göre)...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
22 G korumalı IV Kateter	Bd	381423
Evans mavi boya	Sigma-Aldrich	E2129
LED-30W Fiber Optik Çift Deveboynu Işıkları Mikroskop Aydınlatıcı	AmScope (AmScope)	NEDEN ÜRETİMİ-30W
Hassas kayma iğnesi, 18G x 1"	Bd	305195	Eğimli uç, 12 mm uzunluk

Gazetesi Serisi