Akciğer Karsinomu Hücrelerinin 3 Boyutlu Kültürü: Hücre-Matriks Etkileşimlerini İncelemek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Chen, S. et. al. Akciğer Skuamöz Karsinom İlerlemesini Modellemek için Çok Boyutlu Kokültür Sistemi. J. Vis. Uzm. (2020).

Bu videoda, hücre matrisi etkileşimlerini incelemek için akciğer karsinomu hücrelerinin 3 boyutlu kültür tekniği açıklanmaktadır. Protokolde, in vitro organoid oluşturma potansiyelini araştırmak için TUM622 akciğer karsinomu hücrelerinin 3D kültürünü gerçekleştireceğiz.

Protokol

1. TUM622 Hücrelerinin 2D Kültürlerde Geçirilmesi ve Kültürlenmesi

1. 37 ° C'de TUM622 hücreleri için sıcak 3D kültür ortamı ve hücre ayrışma reaktifleri (Malzeme Tablosuna bakınız).
2. 2D şişelerde %80 birleşimde TUM622 hücrelerini geçin. Genellikle, bu geçtikten 1 hafta sonra ortaya çıkar.
3. Eski ortamı bir T75 şişesinden atın ve 6 mL HEPES tamponu ile bir kez yıkayın. Doğrudan hücrelere pipetlemekten kaçının.
4. HEPES tamponunu aspire edin. Hızlı bir durulama için 4 mL tripsin / EDTA (0.25 mg / mL, Malzeme Tablosuna bakınız) ekleyin ve tripsin / EDTA'yı atın.
5. 2 mL tripsin/EDTA ekleyin ve 37 ....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Bronşiyal Epitelyal Büyüme Ortamı	Fransa	CC-3170 BEGM
Hücre Süzgeci 40um	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	352340	TUM622 hücrelerini geçmek için
Soğuk Raf CFT30	Biyozyon	BCS-138	3D kültür için
Soğutma Emici XT96F	Biyozyon	BCS-536	3D kültür için
Cultrex 3D Hücre Toplama Kiti	Biyo-Teknoloji	3448-020-K
Matrigel (monokültür için tercih edilir)	Corning	356231	3D kültür için
Lab-Tec II odacıklı #1.5 Alman Kapak Camı Sistemi	Nalge Nunc Uluslararası	155409 (8)	3D kültür için
Lab-Tec II odacıklı #1.5 Alman Kapak Camı Sistemi	Nalge Nunc Uluslararası	155379 (2)	3D kültür için
ReagentPack Alt Kültür Reaktifleri	Fransa	CC-5034	TUM622 hücre ayrışması için

Serisi Serisi Serisi Serisi