Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

RNA Ekstraksiyon Testi: miRNA Transfekte Edilmiş Akciğer Kanseri Hücrelerinden RNA'yı Çıkarmak İçin Bir Yöntem

1.8K görüntüleme

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

Kaynak: Hossian, A. K. M. N. et al., Hücre Döngüsünü ve Anjiyogenezi Düzenlemek için Kombinatoryal miRNA Tedavilerinin Analizi. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu video, miRNA transfekte edilmiş akciğer kanseri hücrelerinden RNA ekstraksiyon protokolünü açıklamaktadır. Bu yaklaşım, hücre döngüsünü ve anjiyogenezi durdurmada kombinatoryal bir miRNA tedavi aktivitesini tanımlamak için kullanılabilir.

Protokol

1. miR-143 ve miR-506 iletimi

>DİKKAT: Açıklanan deneyleri gerçekleştirirken lateks eldiven, koruyucu gözlük ve laboratuvar önlüğü kullanın. Gerektiğinde, biyogüvenlik kabinini, kabin fanı açıkken, hava yollarını tıkamadan veya laminer hava akışını bozmadan kullanın. Koruyucu cam pencereyi her zaman üretici tarafından açıklandığı gibi uygun yüksekliğe ayarlayın.

  1. NSCLC A549 hücrelerini, bir doku kültürü başlığında% 10 FBS ve% 1 penisilin-streptomisin (kültür ortamı) ile desteklenmiş DMEM / F12K ortamında bir T25 cm2 şişe / 6/96 oyuklu plakada tohumlayın ve bir doku kültürü inkübatöründe....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
A549 Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanseri HücreleriATCC (Uzay Servisi)ATCC CCL-185
Ambion Susturucu Negatif Kontrol No. 1 siRNAAmbion TeknolojisiAM4611
has-miR-143-3p miRNA TaklidiAkbulutMCH01315
has-miR-506-3p miRNA TaklidiAkbulutMCH02824
Fetal Sığır Serumu (FBS)Balıkçı Bilimsel10438026
HyClone Fosfat Tamponlu Salin (PBS)Balıkçı BilimselSH30256FS
DMEM 4.5 g/L Glikoz, Sodyum Pirüvatsız, L-Glutamin ileVWR (VWR)VWRL0100-0500
Invitrogen UltraPure DNase/ RNaz İçermeyen Damıtılmış SuCanlandırıcı10-977-015
Hızlı RNA KitleriZymo AraştırmaR1055
Etanol, Mutlak (200 Kanıt), Moleküler Biyoloji Derecesi,Fisher BiyoReaktifleriBP2818500
-80 °C DondurucuVWR (VWR)VWR40086A
Nano damlaTermo BilimselNanoDrop bir C
96 kuyulu plakaCELLTREAT Bilimsel50-607-511
Penisilin-streptomisin 10/10Antlanta BiyolojisiB21210
CO2 İnkübatörüTermo BilimselHERAcell 150i
dnase (dnasse)Zymo AraştırmaE1010
L-glutamin içeren F-12K Besin Karışımı (Kaighn's Mod.), CorningCorning45000-354
Fetal Sığır Serumu - PremiumAntlanta BiyolojisiS11150 Serisi
Sıcaklık kontrollü santrifüj kibritTermo BilimselST16R Serisi
Sıcaklık kontrollü mikro santrifüj matchineEppendrof Balığı5415R
Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi arası Serisi

Etiketler

miRNA TransfeksiyonuH cre LizisiEtanol PresipitasyonuDNaz lemiRNA PurifikasyonuSantrif gasyon ProtokolqPCR AnaliziMikroarray Analizi