RNA Ekstraksiyon Testi: miRNA Transfekte Edilmiş Akciğer Kanseri Hücrelerinden RNA'yı Çıkarmak İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Hossian, A. K. M. N. et al., Hücre Döngüsünü ve Anjiyogenezi Düzenlemek için Kombinatoryal miRNA Tedavilerinin Analizi. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu video, miRNA transfekte edilmiş akciğer kanseri hücrelerinden RNA ekstraksiyon protokolünü açıklamaktadır. Bu yaklaşım, hücre döngüsünü ve anjiyogenezi durdurmada kombinatoryal bir miRNA tedavi aktivitesini tanımlamak için kullanılabilir.

Protokol

1. miR-143 ve miR-506 iletimi

>DİKKAT: Açıklanan deneyleri gerçekleştirirken lateks eldiven, koruyucu gözlük ve laboratuvar önlüğü kullanın. Gerektiğinde, biyogüvenlik kabinini, kabin fanı açıkken, hava yollarını tıkamadan veya laminer hava akışını bozmadan kullanın. Koruyucu cam pencereyi her zaman üretici tarafından açıklandığı gibi uygun yüksekliğe ayarlayın.

1. NSCLC A549 hücrelerini, bir doku kültürü başlığında% 10 FBS ve% 1 penisilin-streptomisin (kültür ortamı) ile desteklenmiş DMEM / F12K ortamında bir T25 cm² şişe / 6/96 oyuklu plakada tohumlayın ve bir doku kültürü inkübatöründe....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
A549 Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanseri Hücreleri	ATCC (Uzay Servisi)	ATCC CCL-185
Ambion Susturucu Negatif Kontrol No. 1 siRNA	Ambion Teknolojisi	AM4611
has-miR-143-3p miRNA Taklidi	Akbulut	MCH01315
has-miR-506-3p miRNA Taklidi	Akbulut	MCH02824
Fetal Sığır Serumu (FBS)	Balıkçı Bilimsel	10438026
HyClone Fosfat Tamponlu Salin (PBS)	Balıkçı Bilimsel	SH30256FS
DMEM 4.5 g/L Glikoz, Sodyum Pirüvatsız, L-Glutamin ile	VWR (VWR)	VWRL0100-0500
Invitrogen UltraPure DNase/ RNaz İçermeyen Damıtılmış Su	Canlandırıcı	10-977-015
Hızlı RNA Kitleri	Zymo Araştırma	R1055
Etanol, Mutlak (200 Kanıt), Moleküler Biyoloji Derecesi,	Fisher BiyoReaktifleri	BP2818500
-80 °C Dondurucu	VWR (VWR)	VWR40086A
Nano damla	Termo Bilimsel	NanoDrop bir C
96 kuyulu plaka	CELLTREAT Bilimsel	50-607-511
Penisilin-streptomisin 10/10	Antlanta Biyolojisi	B21210
CO2 İnkübatörü	Termo Bilimsel	HERAcell 150i
dnase (dnasse)	Zymo Araştırma	E1010
L-glutamin içeren F-12K Besin Karışımı (Kaighn's Mod.), Corning	Corning	45000-354
Fetal Sığır Serumu - Premium	Antlanta Biyolojisi	S11150 Serisi
Sıcaklık kontrollü santrifüj kibrit	Termo Bilimsel	ST16R Serisi
Sıcaklık kontrollü mikro santrifüj matchine	Eppendrof Balığı	5415R

Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi arası Serisi