May-Grunwald Giemsa boyama: kemik iliği hücrelerini boyamak için bir yöntem

Özet

Kaynak: Mopin, A. et al. Murine C1498 Hücre Hattını ve İlişkili Lösemi Fare Modelini Karakterize Etmek İçin Ayrıntılı Bir Protokol. J. Vis. Uzm. (2016).

Bu videoda, May-Grünwald Giemsa Boyama kullanılarak kemik iliği hücrelerinin boyanması tekniği açıklanmaktadır. Protokolde, morfolojiyi ve diferansiyel sayımı analiz etmek için murin miyeloid lösemi hücrelerini, C149 hücrelerini boyayacağız.

Protokol

1. C1498 Hücre Hattının In vitro Karakterizasyonu

1. C1498 hücrelerinin in vitro kültürü
   1. 50 ml fetal sığır serumu (FBS), 5 ml penisilin (100 U/ml)-streptomisin (100 μg/ml), 500 μl 50 mM β-merkaptoetanol, 5 ml N-2-hidroksietilpiperazin-N-2-etan sülfonik asit (HEPES), 5 ml esansiyel olmayan amino asit ve 500 ml RPMI ortamına 5 mL sodyum piruvat ekleyerek tam RPMI (Roswell Park Memorial Institute) 1640 ortamı hazırlayın.
   2. C1498 hücre hattını tam RPM'de büyütün. Hücreleri pipetleme ile süspansiyon halinde toplayın ve hücreleri 50 ml'lik bir tüpe aktarın. 350 x g'da 10 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
C1498 hücre hattı	ATCC (Uzay Servisi)	TİB 49
2-Merkaptoetanol, Gibco	ThermoFisher Bilimsel	21985
Fetal Sığır Serumu (FBS)	ThermoFisher Bilimsel	10270
HEPES, Gibco (1 M)	ThermoFisher Bilimsel	15630
Penisilin-Streptomisin, Gibco	ThermoFisher Bilimsel	15140
RPMI 1640 Orta (Gibco, GlutaMAX Takviyesi)	ThermoFisher Bilimsel	61870
Tripan mavisi çözeltisi (% 0.4	ThermoFisher Bilimsel	15250-061	Konsantrasyon 1/2
Hazne ve filtre kartı (EZ Cytofunnel Shandon)	Termo Bilimsel	A78710003
May-Grünwald çözümü	RAL Teşhisi	320070
Giemsa R çözümü	RAL Teşhisi	320310	Konsantrasyon 1/20
pH 6.8 tampon çözeltisi	RAL Teşhisi	330368
Slaytlar (Starfrost - zemin kenarları 90)	Örgü Cam	VS1137# 077FKB
Mikroskop Kapak Camları, 24 x 24mm	Örgü Cam	VD1 2424 Y100
Shandon Cytospin 3 Sitosantrifüj	ThermoFisher Bilimsel