Yöntem makalesi

Fare Arka Uzvundan Kemik İliği Alımı

9 Şubat 2026

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Zhu, YP, Padgett, et al. Nötrofil soy hücrelerinin kütle sitometrisi analizi için tüm kemik iliğinin hazırlanması. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu videoda, lösemi gibi kan hastalıkları olan hastalarda tüm BM kusurlarını araştırmak için farenin arka bacaklarından taze tüm kemik iliğini izole etmek için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Hasat Fare Kemik İliği (BM)

  1. Ticari bir satıcıdan C57BL/6J fareler satın alın. Standart kemirgen yemi diyetini besleyin ve patojen içermeyen bir tesiste mikroizolatör kafeslerinde barındırın.
  2. Deneysel amaçlı olarak 6-10 haftalık erkek fareler kullanın. CO2 inhalasyonu ile ötenazi yapın ve ardından servikal çıkık gelir.
  3. Fareyi karın tarafı yukarı bakacak şekilde steril bir cerrahi ped üzerine yerleştirin. % 70 etanol püskürterek karın ve arka bacak bölgesinin cildini sterilize edin. Karın boşluğunu açmak için bir çift diseksiyon cerrahi makası kullanın.
  4. Arka ayakları ortaya çıkarmak için cildi çıkarın. Fare kaval kemiğini ayak bileğinin hemen altında tutmak için bir çift künt uçlu pansuman forseps kullanın. Kaval kemiğini künt uçlu pansuman forsepslerinin altında stabilize etmek için başka bir çift kavisli pansuman forseps kullanın. Kaval kemiğini kırın ve künt uçlu pansuman forseps ile kası kopararak kemiği açığa çıkarın.
    not: Tibia diz eklemine gevşek bir şekilde tutturulmuştur ve künt uçlu pansuman forsepsleri kullanılarak kolayca çıkarılabilir.
  5. Kaval kemiğini soğuk 1x PBS'ye yerleştirin.
  6. Ardından, dengeleyici kavisli pansuman forsepslerini uyluk kemiğine doğru aşağı doğru hareket ettirin. Künt uçlu pansuman forsepslerini diz ekleminin altına kaydırın ve diz kapağını tutun. Diz kapağını yavaşça yukarı çekerek yerinden çıkarın. Diz kapağına bağlı kası kopararak uyluk kemiğini ortaya çıkarın. Açıkta kalan uyluk kemiğini kavisli pansuman forsepslerinden tutun ve diseksiyon cerrahi makası kullanarak uyluk kemiğini kemiğin altından kesin.
  7. Femuru soğuk 1x PBS'ye yerleştirin.
  8. 18 G'lik bir iğne ile 0,5 mL mikrosantrifüj tüpüne bir delik açın.
  9. Hem tibia hem de femuru, kemiklerin açık ucu deliğe bakacak şekilde aynı 0.5 mL mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin.
  10. Hem tibia hem de femur içeren 0,5 mL'lik tüpü 1,7 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin.
  11. Hem tibia hem de femur içeren çift katmanlı tüpleri mikro santrifüjde 30 saniye boyunca 5.510 x g'da döndürün.
  12. BM'nin kemiklerden çıkarıldığından ve tüpün dibinde peletlendiğinden emin olun. Kutsal kemikleri içeren 0,5 mL'lik tüpü atın. Fare BM sonraki adımlar için hazır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Fare: C57BL/6JJackson LaboratuvarıStok No: 000664
HyClone Fosfat Tamponlu Tuzlu su çözeltisiGE Yaşam BilimleriKedi#SH30256.01

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Femur Tibia zolasyonuMikro santrif j T p Y ntemiSo uk PBS SaklamaCerrahi DiseksiyonHematopoetik K k H crelerT m Kemik li iN trofil Soy Hatt AnaliziK tle Sitometrisi Haz rl

İlgili makaleler