İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Kemik iliği aspirasyonu ve örnek hazırlama
- Hasta ve malzeme hazırlama
- Bir veya iki adet 10 mL şırıngayı 16 gauge iğne kullanarak% 1 lidokain ile doldurun. İğneyi 21 gauge iğne ile değiştirin.
- Bir saat camına iki damla %5 EDTA damlatın.
- Smear preparatları için cam slaytlar (n = 15 tutarlı hasta numaralandırması ve tarihi ile) ayarlayın.
- Hastayı lateral dekübit pozisyonuna getirin. Superior posterior iliak omurgayı bulun ve pen.
ile işaretleyin
not: Genel olarak, posterior superior iliak omurga, iliak krestin bir el genişliği distalinde ve orta hattın lateralinde bir el genişliği bulunur. Kadınlarda, gerçek omurga biraz daha lateral, bazı erkeklerde biraz daha medial olabilir.
- Cildi, amaçlanan biyopsi alanından dışa, daireler halinde etanol içinde% 0.5-1 klorheksidin ile dezenfekte edin.
- Steril eldiven paketini açın, steril eldivenleri giyin ve steril bir alan oluşturmak için paketi masanın üzerine koyun. Paketi aspirasyon iğnesi ile açın ve steril alana yerleştirin.
- Cildi ve deri altı dokusunu ve son olarak periosteuumu infiltre edin. Periosteumda, lidokaini 1 cm çapında bir alan uyuşturulacak şekilde uygulayın.
not: Lidokainin periosteuma yeterli uygulanması hasta konforu için en önemli faktörlerden biridir. Yerleştirilen iğne ile amaçlanan biyopsi yerine dokunarak periostun yeterince uyuşturulup uyuşturulmadığını test edin ve hastanın herhangi bir ağrı hissedip hissetmediğini sorun. Not: Çocuklar tüm prosedür boyunca tamamen uyuşturulur.
- Aspirat iğnesini (15 Ga x 2.8 "), proksimal ucu avuç içinde ve işaret parmağınızda olacak şekilde iğnenin metal milinin ucuna yakın tarafına doğru tutun; bu pozisyon daha iyi kontrol sağlar.
- İğneyi deriden iliak omurgaya doğru dönen bir hareketle (hızlı bir şekilde değişen pronating / supinasyon hareketi ile) sokun ve iğneyi posterior iliak omurga ile temas ettirin.
- İğnenin periostun uyuşturulmuş bölgesine sokulduğundan emin olun; hasta sadece basınç hissetmeli ve ağrı hissetmemelidir. Hasta ağrı hissederse, iğneyi yeniden konumlandırın veya daha fazla lidokain uygulayın.
- Nazik ama sıkı bir basınç kullanarak, iğneyi saat yönünde-saat yönünün tersine dönüşümlü bir hareketle döndürürken ilerletin. Kemik iliği boşluğuna giriş genellikle direncin azalması ile tespit edilir.
- Stileyi iğneden çıkarın. İğneye 10 mL boş bir şırınga takın.
- Şırınga pistonunu hafif bir çekme ile geri çekerek negatif basınç uygulayın. Hastayı, ilik aspire edilirken kramp hissi ve ağrı hissedebileceği konusunda uyarın. Yeterli kemik iliği spikülü salınmazsa, hızlı bir çekme ile başka bir aspirasyon yapılmalıdır. Çoğu spikül, ilk çekmeden elde edilen ilk 1-2 mL'de olacaktır. Numunenin seyreltilmesini önlemek için sadece 1-2 mL aspire edin.
not: Seyreltme hemodilüsyona neden olur ve MRD sonuçlarını karıştırabilir.
- Şırıngayı çıkarın ve stileyi aspirasyon iğnesine yerleştirin. İliğin bir kısmını bir saat camına, geri kalanını ise heparinle kaplanmış 8 mL'lik bir tüpe atın.
not: Yeterli antikoagülasyonu sağlamak için kemik iliği aspiratını numune tüpüne yerleştirdikten hemen sonra her bir tüpü ters çevirin. Kemik iliği pıhtılaşması genellikle uygunsuz materyalin nedenidir. Aynı noktadan ek kemik iliği de aspire edilebilir, ancak tercihen yeni bir aspirat alınmadan önce iğne 5-10 mm ilerletilir. Tercihen, yerleştirme seviyesi başına 2'den fazla çekiliş yapılmamalıdır. Tüpleri birinci, ikinci ve/veya ardışık çekilişleri temsil eden artan sayılarla işaretlediğinizden emin olun. En uygun tanı analizi için ilk çizimi kullanmak yaygın bir kuraldır.
- Alternatif olarak, iğneyi yerleştirme yerinden geri çekin ve orijinal yerleştirme yerinden birkaç milimetre uzaktaki ilik boşluğuna yeniden sokun ve işlemi tekrarlayın.
not: Önemli kan kontaminasyonunu önlemek için çekme başına 1-2 mL'den fazla aspire etmeyin.
- Malzemeye ihtiyaç duyulduğu kadar tekrarlayın. Spesifik klinik çalışma protokolü için yeterli materyal aspire edildiğinde, kemik iliği iğnesini çıkarın.
not: Yavaş veya başka bir şekilde zor kemik iliği aspirasyonları durumunda, antikoagülan ile önceden yıkanmış şırıngaların kullanılması yardımcı olabilir. Musluk kuruluğu durumunda, bu yazının kapsamı dışında kalan bir trephine biyopsisi yapın.
2. Morfolojik inceleme için smear hazırlanması
- Optimum morfolojik değerlendirme için, saat camındaki aspirattan spikülleri (örneğin plastik bir spatula kullanarak) çıkarın ve bunları bir cam slayt üzerine yerleştirin.
- İliğinizle birlikte sürgünün üzerine yavaşça başka bir cam slayt yerleştirin ve yavaşça kaydırın; herhangi bir basınçtan kaçının.
not: Sadece çok büyük kemik iliği spikülleri durumunda, hücre yayılımının kalınlığını azaltmak için hafif bir basınç uygulanabilir. Prosedür, numune tüplerini idare edebilecek bir asistanın yardımından yararlanır. Tüplerin hasta numarası ve sıralı kemik iliği çekimi numarası ile doğru etiketlenmesi çok önemlidir.
- Slaytı iyice kurulayın ve ardından May Giemsa Grünwald boyaması yapın (malzeme tablosuna bakın). Morfoloji için ışık mikroskobu altında inceleyin (bkz. Şekil 1).
NOT: Şekil 1A, farklı fonksiyonel hücre tiplerinden oluşan sağlıklı kemik iliği yaymalarını gösterirken, Şekil 1B, ağırlıklı olarak lösemik blastları olan bir AML hastasıdır. Rezidüel lösemik yükü daha iyi tanımlamak için immünofenotipleme yapılması gerekir.
