İn Vitro Pankreatik Nöroplastisite Deneyi: Sağlıklı ve Kanserli İnsan Pankreas Dokusu Ekstraktlarına Maruz Kalan GI Yolu Nöronlarındaki Değişikliklerin İncelenmesi

Özet

Kaynak: Demir, İ. E., et al. Pankreatik Nöroplastisite Simülasyonu: İn Vitro Çift Nöron Plastisite Testi. J. Vis. Uzm. (2014).

Bu video, sağlıklı ve kanserli insan pankreas dokusu ekstraktlarına maruz kalan dorsal kök gangliyonları ve myenterik pleksus nöronlarındaki morfolojik değişiklikleri incelemek için in vitro nöroplastisite testini göstermektedir. Bu tahlil, nörit büyümesini, dallanma modelini ve nöronal boyutu incelememize izin verir.

Protokol

1. Nöronların İzolasyonu

Ekstrakt/süpernatant toplama işlemi bittiğinde, nöronların izolasyonu ile devam edin.

1. DRG nöronları için, DRG'nin dekapitasyonu ve stereomikroskobik diseksiyonundan sonra doğum sonrası (P) 2-12 arasında yenidoğan sıçanların servikal ila lomber DRG'sini toplayın (Şekil 1A). 24 oyuklu bir plaka için yeterli DRG nöronlarına sahip olmak için, plaka başına bir yenidoğan sıçanın (52 DRG'ye eşit) tüm servikal ve lomber DRG'sini toplayın.
2. DRG'nin periferik (nöral) ve merkezi çıkıntılarını (köklerini) mikromakas yardımıyla kesin. Projeksiyonları yerinde bırakmak tritüra....

Sonuçlar

Şekil 1. İn vitro nöroplastisite testinin şematik protokolü. Bu test, pankreas dokusu ekstraktlarının veya hücre süpernatanlarının nöronal ve glial morfoloji üzerindeki etkisini incelemek için yenidoğan sıçan dorsal kök gangliyonları (DRG) ve myenterik pleksus (MP) nöronlarını kullanır. Anterior laminektomi sonrası DRG toplanır ve ince bağırsağın (A, B) rezeksiyonu ve mekani.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Poli-D-lizin hidrobromür	Sigma-Aldrich	P1149 Serisi
Ornitin/laminin	Sigma-Aldrich	P2533/L4544
13 mm Lameller	Merck		24 oyuklu plakada kullanım için
Çözücü S	Sartorius
Anti-Beta-III-tubulin antikoru	Kırlangıç	MAB1637	1:200 konsantrasyon
Anti-GFAP-antikoru	DAKO	M0761	1:400 konsantrasyon
RIPA tamponu + proteaz inhibitörü			Herhangi bir tedarikçi
Nörobazal ortam	Gibco/Yaşam Bilimleri	21103-049
B-27 Takviyesi	Gibco/Yaşam Bilimleri	17504044	B-27'nin kalitesinin lot numarasına bağlı olduğu bilinmektedir
Gentamisin/Metronidazo			Herhangi bir tedarikçi
Minimal esansiyel ortam	Gibco/Yaşam Bilimleri	31095-029
Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS)	Gibco/Yaşam Bilimleri	24020133	Ca/Mg içerdiğinde kollajenaz aktivitesini iyileştirir
Kollajenaz tip II	Worthington Biyokimyasal	CLS-2	En az 200 U / mg aktiviteye sahip lotlar elde edin
Tripsin-EDTA %0.25	Gibco/Yaşam Bilimleri	25200056
% 4 Paraformaldehit			Herhangi bir tedarikçi
AnalySIS doküman yazılımı	Olympus

Gazetesi Gazetesi Serisi Serisi Serisi