Bakteriyel Gen İfadesi Analizi Mikroarray'ler Kullanımı

Protocol

Ters Transcriptase Reaksiyon

70-80 ° C ve 42 ° C ısıtma bloğu açın Su banyoları da bu adımda kullanılabilir. Isıtma bloklar kullanılıyorsa, ısı tekdüze böylece biraz su koyun.

1. Astar tepki
   1. RNA 3 mg alın
   2. 13 ul RNaz ücretsiz su ile ses seviyesini ayarlayın.
   3. Rastgele hexamer primerler (2mg/mL) 2.5 ul ekle
2. İyice karıştırın ve 8 dakika 70-80 ° C'de inkübe edin. Daha sonra, 5 dakika buz koyun.
3. : RT kokteyl hazırlayın (14.5 ul / RXN)
   
   

   Bileşen	Hacim
   5X İlk Strand tampo....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
AA-dUTP		Sigma-Aldrich	A0410	5-(3-aminoalil)-2' deoksiuridin-5'-trifosfat
dNTP		Amersham	27-2035-01	100 mM dNTP Set PCR sınıfı
Rastgele Hexamer primerleri		Amersham	27-2166-01	3mg/mL
SuperScript III RT		Invitrogen	80800444	200U/μ L
CyDye™		Amersham	RPN5661	Etiketleme Sonrası Reaktif Boya Paketi
QIAquick		Qiagen	28104	PCR Saflaştırma kiti
1 M K2HPO4
1 M KH2PO4
1 M KPO4	Tamponu			1M Fosfat tamponu (KPO4, pH 8.5-8.7) yapmak için birleştirin: 9.5 mL 1M K2HPO4 ve 0.5 ml 1M KH2PO4
Fosfat yıkama tamponu	Tampon			100 mL Fosfat yıkama tamponu (5 mM KPO4, pH 8.0, %80 EtOH) karışımı: 0.5 ml 1 M KPO4 pH 8.5 + 15.25 mL MilliQ su + 84.25 mL %95 etanol. Yıkama tamponu biraz bulanık olacaktır.** ÖNEMLİ: Fosfat yıkama tamponu günlük olarak hazırlanmalıdır.
Fosfat elüsyon tamponu	1			M KPO4, pH 8.5 ila 4 mM steril su ile seyreltme
tamponu Sodyum Karbonat Tamponu				(Na2CO3): 0.5M, pH 9.0. 4.2 g NaHCO3'ü 80 mL steril suda çözün ve pH'ı 10 N NaOH ile 9.0'a ayarlayın; steril su ile 100 mL'ye kadar hacim getirin. Boya birleştirme reaksiyonu için 50 mM'lik bir çözelti yapmak için 1:10 oranında su ile seyreltin. Not: Karbonat tamponu zamanla bileşimi değiştirir; Her birkaç haftadan bir aya kadar taze yapın.