Method Article

Fare Visual Cortex İnceltilen kafatası Hazırlık Kronik Görüntüleme

DOI:

10.3791/2060

⸱

October 25th, 2010

 , 
1Neurobiology and Anatomy, University of Rochester

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu video ve tamamlayıcı malzeme, kronik bir protokol In vivo Seyrelmiş bir kafatası hazırlık kullanarak sağlam beyin görüntüleme.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bozulmamış beyin hücreleri ve nöronal süreçleri yaşayan iki foton lazer tarama mikroskobu (2PLSM) kullanarak in vivo görüntüleme çalışma sağlar. Burada sunulan teknik MSS eksitatör postsinaptik sitelerin büyük çoğunluğu temsil eden küçük yapılar dendritik dikenler izleme izin mikroskobik çözünürlüğü ile çeşitli zaman noktalarında (kronik görüntüleme) aynı bölgede beyin görüntüleme sağlar. Ince kortikal yapıların, birkaç kez puan üzerinden açıkça çözmek için yeteneği, sinapsların morfolojik değişiklikler ve devre remodelling altta yatan mekanizmaların açıklanmasına yardımcı olan beyin plastisite çalışma, özellikle pek çok avantajı vardır. Bu video ve tamamlayıcı malzeme, kronik seyrelmiş bir kafatası hazırlık kullanarak bozulmamış beyin in vivo görüntüleme için bir protokol göstermektedir. Inceltilmiş kafatası hazırlama, minimal invaziv bir yaklaşım, böylece bir inflamatuar yanıt başlangıcı azaltarak, dura ve / veya korteks potansiyel zarar görmesini engeller. Bu protokol doğru yapıldığında, açıkça zaman uzun bir süre içinde bozulmamış beyin dendritik omurga özellikleri değişiklikleri izlemek için mümkündür.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Iki foton mikroskopi, nöronlar floresan işaretleri ile etiketlenmiş bir hazırlık kullanarak sağlam beyin nöronları görselleştirmek için kullanılmaktadır. Deneylerde burada sunulan 5 piramidal hücrelerde 1 tabaka etiketler GFP-M transgenik fare hattı kullanıyoruz. Katman 5 piramidal hücreleri pia seviyesinin altında 300 mm derinliğe kadar, dendritler ve dendritik dikenler görselleştirme sağlayarak, yüzeysel katmanlarına dendritik süreçleri proje. Etiket hücrelere viral belirteçlerin (Lowery ve ark, vallahi teslim) kullanarak alternatif bir yaklaşım.
  2. Aseptik cerrahi için% 70 etanol ve otoklav araçları kullanarak çalışma alanı sterilize edin. Temiz bir sar....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Iki foton mikroskopi kullanılarak Kronik görüntüleme plastisite 2-5 sırasında tetiklenen morfolojik değişiklikleri incelemek için giderek daha popüler bir teknik haline gelmektedir . Burada farklı görüntüleme gün bozulmadan fare beyin tespit dendritik dikenler takip seyrelmiş bir kafatası hazırlık göstermektedir. Bu protokolde, korteks minimal hasara neden kafatası ve beyin fonksiyonu 6 değiştirebilir nöro çok düşük seviyelerde ile sonuçlanan, değişmeden kalır. Bu hayvan, ilk cerrahiden hemen sonra.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Biyomedikal Bilimler (AKM) Burroughs Wellcome Kariyer Ödülü tarafından desteklenen, Whitehall Vakfı Araştırma Bursu (AKM), Sloan Vakfı Bursu (AKM), NIH EY019277 (AKM) ve bir NEI tarafından finanse edilen, Vizyon Eğitim Grant, EY013319 ( EAK).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Fentanil SitratEvdeFentanil Kokteyli: Anestezik Kokteyl;
IP Dozu: 0.0125 ml/g

Son kokteyl konsantrasyonu: 0.05 mg/kg
Medetomindine HidroklorürEvdeFentanil Kokteyli: Anestezik Kokteyl;
IP Dozu: 0.0125 ml/g

Son kokteyl konsantrasyonu: 0.05 mg/kg
Midazolam HCLEvdeFentanil Kokteyli: Anestezik Kokteyl;
IP Dozu: 0.0125 ml/g

Son kokteyl konsantrasyonu: 0.05 mg/kg
2,2,2-tribrom– thanol Avertin Kokteyli: Anestezik;
IP Dozu: 0.0075 cc / g < br / >< br / > Son kokteyl konsantrasyonu: %1
2-metil-2-bütanol (Son konsantrasyon: %0.775)Avertin Kokteyli: Anestezik;
IP Dozu: 0.0075 cc/ g

Son kokteyl konsantrasyonu: .775%
TC-1000 Sıcaklık FarelerCWE, Inc.TC-1000 Fare VücutSıcaklığı Düzenleme
ToberadexEvdeGöz Merhemi
%10 Ferric ChlorideRicca Chemical Company3120-32İnce kafatası hazırlama
Mikrocerrahi BıçakSamur EndüstrileriS-6400İnce kafatası hazırlama
Siyanoakrilat 404,401LoctiteP / N 46551İnce kafatası hazırlama
Siyanoakrilat 401LoctiteP / N 40140İnce kafatası hazırlama
Zip Kicker Tutkal HızlandırıcıPacer TeknolojisiPT-29İnce kafatası hazırlama
Mikro Matkap Çelik Çapaklar 0.7mm uç çapıGüzel Bilim Araçları19008-07İnce kafatası hazırlama
Microtorque Kontrol Kutusu ve Tech2000 El aletiRam Ürünleri, Inc.TECH2000ON/KAPALIİnce kafatası hazırlığı
# 6-0 (0.7 metrik) ipek sütürEthicon Inc.K8894HKonik C-1
Göz Pansuman Forseps, 10cm, uç genişliği 0,5 mm, kavisliCerrahi AletlerGüzel Bilim Aletleri11152-10
Ekstra İnce Bonn Makas, 8,5 cm, düz uç, kesici kenar 13mmCerrahi AletlerGüzel Bilim Aletleri14084-08
Standart Desen Forseps, düz, 2,5 mmx1,35 mmtip, 12 cmCerrahi AletlerGüzel Bilim Aletleri11000-12
için Kontrol Sistemi

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-51 (2000).
  2. Holtmaat, A. high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4<....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Two Photon ImagingDendritic Spine ImagingThinned Skull PreparationChronic Brain ImagingMouse Visual CortexGFP Labeled NeuronsDendritic Spine MorphologyCortical Plasticity StudyIn Vivo MicroscopySkull Thinning Protocol

Related Articles