Matrix Rijitlik Akrilamid tabanlı Hidrojeller kullanarak Hücresel Fonksiyon Üzerindeki Etkilerinin incelenmesi

Summary

Hücresel fonksiyonları katmanlarından sertlik etkisi modellenmiş olabilir In vitro Uyumluluklar değişen poliakrilamid hidrojeller.

Abstract

Doku sertliği hücresel fonksiyonunun önemli bir belirleyicisi olup, doku sertliği değişiklikler yaygın fibrozis, kanser ve kardiyovasküler hastalık ^1-11 ile ilişkilidir. Geleneksel hücre biyolojik yaklaşımlar hücresel fonksiyonu çalışmalarında elastik bir ECM ya da dokular arasında ECM sertlik değişikliklerin etkisini dikkate almaz, katı bir alt tabaka üzerinde kültür hücreleri (plastik tabaklar ya da cam lamelleri) içerir. In vitro, in vivo doku uyumu şartları model için, biz ve diğerleri ECM-kaplı hidrojeller kullanın. Laboratuvarımızda, hidrojeller dizi ¹² biyolojik olarak görülen doku uygunluk bildirimleri taklit edebilir poliakrilamid dayanmaktadır. "Reaktif" kapak fişleri 3-APTMS Ayrıca NaOH ile kuluçka tarafından üretilir. Glutaraldehyde 3-APTMS ve poliakrilamid jel çapraz bağlamak için kullanılır. Akrilamid (AC), bis-akrilamid (Bis-AC) ve amonyum persülfat bir çözüm hidrojel polimerizasyon için kullanılır. N-hydroxysuccinimide (NHS), hidrojel çapraz ECM protein AC çözüm içine dahil edilmiştir. Hidrojel polimerizasyonu sonra jel yüzeyi, fibronektin, vitronectin, kollajen, vb gibi bir seçim ECM protein ile kaplıdır

Bir hidrojel sertlik reoloji veya atomik kuvvet mikroskobu (AFM) tarafından belirlenir ve çözüm ¹² AC ve / veya bis-AC yüzdesi değişen ayarlanabilir. Bu şekilde, alt tabaka sertlik reoloji veya AFM kullanılarak belirlenebilir Biyolojik dokuların sertlik eşleştirilmiş olabilir. Hidrojeller ve kültürlü gerekli deneysel koşullar dayalı bu hücreler daha sonra numaralı seribaşı olabilir. Moleküler analiz için hücre ve onların kurtarma Görüntüleme basittir. Bu yazı için, yumuşak katmanlarından 20.000 Pascal <E 3000 Pascal ve sert doku katmanlarından /> elastik modülü (E) olarak tanımlar.

Protocol

Hazırlık

• Lameller otoklava olmalıdır.
• Steril distile veya deiyonize su çözümler hazırlamak ve çamaşır lamelleri için kullanılmalıdır.
• AC (% 40 w / v) ve bis-AC (% 1 w / v) çözümleri 0.2 mikron filtre ile sterilize edilir. Kullanımı ve steril filtre kısa bir süre önce,% 10 amonyum persülfat (100μg/ml su APS) hazırlayın. APS çözüm aylık değiştirin.
• 3-APTMS, kloroform, glutaradehyde, NHS ve SurfaSil gibi kimyasal reaktifler otoklavlanmalıdır sadece hidrojellerin hazırlanması için kullanılan atanmış bir şişe içinde tutulur.
• En iyi sonuç için, hidrojeller uygun ECM protein ile geceleme inkübasyondan sonra birkaç gün içind....

Discussion

Hidrojel polimerizasyon işlemi çok önemli bir unsur hücreleri ECM-kaplı hidrojel kendini daha ziyade cam lamel bağlamak sağlayacak hava kabarcığı oluşumunu önlemek için. Bu vorteks ve görsel hiçbir hava kabarcığı jel tuzak haline emin sonra dikkatli bir şekilde polimerizasyon çözüm pipetleme önlenebilir. Biz her zaman deneyler için yeterince sağlamak için ek "reaktif" lamelleri ve hidrojellerin hazırlanması önerilir.

Jeller PBS ile yıkanır zaman özellikle dikkat edilmelidir. Hidroj.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Glutaraldehit, %70	Sigma-Aldrich	G7776	-20°'de saklayın;
C3-APTMS (3-Aminopropiltrimetosisilan% 97)	Sigma-Aldrich	281778	Oda sıcaklığında saklayın
SurfaSil Silikonlaştırıcı Sıvı	Thermo Fisher Scientific, Inc.	42800	Oda sıcaklığında saklayın
NHS (N-hidroksisucinimid Ester)	Sigma-Aldrich	A-8060	4°'de saklayın; C Aylık
Albümin, sığır serumu, esasen yağ asidi içermeyen	Sigma-Aldrich	A6003-100G'yi	değiştirin 4°'de saklayın; C
Lamelleri (25mm)	Fisher Scientific	12-545-86 25 Cir 1D
Lameller (18mm)	Fisher Scientific	12-545-84 18 Cir 1D