Kapalı Kranial Pencere kullanarak Fare Beyin Mikrosirkülasyon intravital Mikroskopi

Summary

Intravital mikroskopi pial mikrosirkülasyon zamansal ve mekansal hemodinamik ve inflamatuar olayları takip etmek.

Abstract

Bu deneysel model, in vivo floresan mikroskobu kullanarak, akut ve kronik, fizyolojik ve patofizyolojik hemodinamik, inflamatuvar ve metabolik koşullar sırasında fare pial mikrosirkülasyon değerlendirmek için tasarlanmıştır . Kapalı bir kafa penceresi farelerin sol parieto-oksipital kortekste üzerine yerleştirilir. Yerel mikrosirkülasyon epi ve floresan aydınlatma, ve damarların çapları ve kırmızı kan hücre (RBC) hızları yapılan ölçümleri kullanarak pencere üzerinden gerçek zamanlı olarak kaydedilir. RBC hızı gerçek zamanlı çapraz korelasyon ve / veya floresan etiketli eritrositler kullanılarak ölçülür. Perfüzyon ve vasküler sızıntı pial damarları ve değerlendirme Lökosit ve trombosit bağlılık Albumin-FITC ve anti-CD45-TxR antikorları gibi floresan etiketli işaretleyicileri yardımıyla yapılır. Mikrosirkülasyon birkaç gün içinde tekrar tekrar video kayıt olabilir. Biz ilk defa pial mikrosirkülasyon çalışmada farelerde Plasmodium berghei ANKA enfeksiyonu seyri sırasında dinamik değişiklikleri takip edebilecek ve CM ifade kan derin düşüş, vazokonstriksiyon ile karakterize mikrosirkulasyonu işlev bozuklukları ile ilişkili olduğunu göstermek için pencereyi kapat beyin intravital mikroskopi için kullanılan akış ve sonuçta vasküler çöküşü.

Protocol

1. Kraniotomi

8-10-haftalık farelerde kraniotomi titanyum çubuk baş hayvanın yer almamış olması dışında, daha önce açıklanan ¹ olarak önceden yapılması gerekir. Kronik kafa penceresi pial mikrosirkülasyon hatta aylar implante edildikten sonra istikrarlı bir hazırlık izin muayene. Genellikle 2-3 hafta kafatası pencere implantasyon sonrası çalışmaları yapmak.

2. Intravital mikroskopi

1. İki-üç hafta sonra kraniotomi, vücut ısısı kontrol edilmeli ve sonra fare ile hafifçe anestezi izofluran (indüksiyon için% 4, bakım için% 1-2). Hafif anestezi deneysel prosedür sırasında hayvan stres ve rahatsızl....

Discussion

Burada açıklanan intravital mikroskopi yöntemi fare pial mikrosirkülasyon detaylı gözlem için benzersiz ve güçlü bir araç sağlar. Diğer bireysel arteriyollerin ve venüller singling ve damar çapları, RBC hızları, kan akımı, bağlılık ve lökosit, trombosit ve diğer kan elemanları, vasküler kaçak, doku pH ve pO2 haddeleme gibi parametreleri bir dizi değişiklikler ölçüm sağlar ve potansiyel olarak pek çok uygulamaları. In vivo vasküler yanıt ilaç idaresine gibi müdahaleler üzerine derhal değerlendirilir veya patoloj.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
İzofluran	Baxter Uluslararası A.Ş.
Karbosiyanin boyası Dil	Moleküler Problar, Yaşam Teknolojileri	D306
Albumin-FITC	Sigma-Aldrich	A9771
Anti-CD45-TxR Ab	Invitrogen	MCD4517
P. berghei ANKA-GFP	MR4	MRA-865