Birçok enfeksiyonları güçlü bir CTL yanıtı ortaya çıkarmak, fakat bazen yanıt hücrelerinin miktarı patojenin kontrol etmek için orantılı değildir 1. CTL kaliteli bir önlem özellikle öldürmek için yeteneklerini 2. Hedef hücrelerin KAKE etiketleme bu CTL yanıt kalitesini araştırmak için kullanılabilir In vivo 3,4.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Carboxyfluorescein diasetat succinimidyl ester (KAKE) kolay ve hızlı bir şekilde in vivo soruşturma ilgi bir hücre popülasyonu etiket kullanılabilir. Bu etiketleme klasik çoğalması ve göç çalışması için kullanılır olmuştur. Burada sunulan yöntem, epitop KAKE etiketli hedef hücreleri 4-6 hayatta kalma ve öldürme bakmak için evlatlık transferinden sonra, zaman çizelgesi kısaltılmış var. Miktarları yanıltıcı olabilir gibi spesifik CD8 + T hücre klonu öldürme seviyesi, kalite yanıt gösterebilir. CD8 + T hücreleri, sitokin üretimi ve öldürme 7,8 düşüş zaman içinde işlevsel olarak tükenmiş olabilir Özgül. Ayrıca, belirli CD8 + T hücre klonlar TCR özgüllükleri 9 farklı yanı sıra diğerleri gibi öldürmek olmayabilir. Etkili Hücre aracılı bağışıklık (CMI), antijenler, T hücreleri yanıt yeterli sayıda sadece üreten tespit değil, aynı zamanda işlevsel olarak sağlam bir yanıt T hücreleri olmalıdır. Burada iki peptid BALB / c farelerde spesifik T hücre klonları yüzde hücre özel öldürme değerlendirir.
Protokol
1. Hedef Özel Efektör CTL'lerin Bağışıklama ortaya çıkartılması (Gün 0)
- Hedef sistemi: başlamadan önce, belirli bir efektör üzerine karar verebilir. Klasik bir in vivo CTL tahlil Bu örnekte, spesifik CD8 + T hücreleri ortaya çıkarmak için saflaştırılmış bir peptid bağışıklama kullanabilirsiniz. Hedef sistemi: Aynı peptid singeneik hedef hücreleri belirli bir efektör yaratarak darbe olacaktır. Alternatif olarak, özel etkileyiciler ve hedefleri elde etmek için tüm patojen veya protein kullanmayı tercih edebilir.
- Enjeksiyonları kısırlık sağlamak için çalışma yüzeyinin bir biyogüvenlik kaput içinde dekontamine. İlk 50 mg, 2 mL tüp içinde yer....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
KAKE döl 10,11 arasında nispeten eşit böler, çünkü bu testte, klonal genişleme de dahil olmak üzere hücrelerin proliferatif kapasitesi araştırmak için değiştirilebilir. Örneğin tetramers ve biyoparlaklık 13, KAKE etiketleme ile kombine edilebilir hipoteze göre daha uygun olabilir yöntemleri diğer hücre izleme, var olmasına rağmen, hücre göçü 6,12 araştırmak için KAKE etiketleme kullanmak da mümkün.
PE de işe yaramayabilir ise bir yüzey işaretleyici için eş-le.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti. Wisconsin-Madison Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak hayvanlar üzerinde deneyler yapıldı.
Teşekkürler
Bianca MOTHE Carla Oseroff ve Marie-France DelGuercio immünolojik testleri ve fare kullanımı için beni tanıştırdığı için teşekkür etmek istiyorum. GA Splitter laboratuarda çalışma NIH hibe 1-RO1-AI-073.558, GLRCE hibe 1-U54-AI-057.153, BARD ABD-3829-06 tarafından finanse edilmektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1 mm cam boncuklar | Biospec Products | 11079110 | |
| 70 μm hücre süzgeci | BD Biosciences | 352350 | |
| 96 kuyucuklu plaka | Costar | 3799 | |
| Adjulite Eksik Freund’s Adjuvanı | Pacific Immunology | n/a | |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D-5879 | |
| FBS | GIBCO, by Life Technologies | 16000-077 | |
| FC 500 Akış Sitometresi | Beckman Coulter Inc. | n/a | |
| Kontes cam doku öğütücü | Kontes Corp | 885300-0015 | |
| Mini Beadbeater | Biospec Products | n/a | |
| İğne | BD Biosciences | 305175 | |
| Parafilm "M" | Pechiney Plastic Packaging | PM992 | |
| Paraformaldehit | Electron Microscopy Sciences | 157-8 | |
| PBS | GIBCO, by Life Technologies | 10010-023 | |
| PharmLyse lizleme reaktifi | BD Biosciences | 555899 | |
| RPMI 1640 | GIBCO, by Life Technologies | 11875-093 | |
| Şırınga | BD Biosciences | 309602 | |
| Vybrant CFSE Kiti | Invitrogen | V12883 |
Kaynaklar
- Blattman, J. N., Wherry, E. J., Ha, S. J., van der Most, R. G., Ahmed, R. Impact of epitope escape on PD-1 expression and CD8 T-cell exhaustion during chronic infection. J Virol. 83 (9), 4386-4394 (2009).
- Jenkins, M. R., Tsun, A., Stinchcombe, J. C., Griffiths, G. M.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
