Burada kadın kara dul örümcekleri karın ipek üreten bezlerin kaldırmak için etkili bir strateji açıklanmaktadır. Bu prosedür, yedi ayrı ipek üreten, son derece saf bir moda, örümcek ipeği üretimi ve lif montaj inceleyen araştırmacılar için önemli bir süreci bezlerinin hızlı bir izolasyon sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Black Widow Spider İpek üreten Bezler, Mikrodisseksiyon
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Modern örümcekler, biyolojik fonksiyonları, hareket, avlarını yakalamak ve gelişmekte olan yavrular 1,2 korunması da dahil olmak üzere geniş bir yelpazede yüksek performanslı ipek lifleri dönerler. Örümcekler farklı mekanik özelliklere sahip birkaç farklı fiber türleri iplik bu görevleri yerine getirmek. Bu tür uzmanlık elyaf türleri küçük biofactories olarak işlev farklı ipek üreten bezleri, evrimle meydana gelmiştir. Bu biofactories üretimi ve elyaf üretimi için ipek proteinleri büyük miktarlarda saklamak. Biyokimyasal olayların karmaşık bir dizi sayesinde, bu ipek proteinleri ekstrüzyon üzerine sağlam bir malzeme bir sıvı haline dönüştürülür.
Mekanik çalışmalar örümcek ipek yüksek gerilimli çelik 3 daha güçlü olduğunu göstermiştir. Analizler örümcek ipek ipler yapı ve fonksiyon arasındaki ilişkiyi anlamak için, örümcek ipeği, büyük ölçüde onların protein dizileri içinde 4 blok tekrarlar proteinler, ya da fibroins ibaret olduğunu ortaya koymuştur. Inanılmaz bir örümcek ipek çekme dayanımı ve genişletilebilirlik katkıda Ortak moleküler imzalar tercüme ipek cDNAs analizleri ile sökülmüş edilmektedir. Örümcek ipekler olağanüstü malzeme özellikleri göz önüne alındığında, dünya çapında araştırma laboratuarları, ticari, askeri ve endüstriyel uygulamalar için sentetik ipek lifleri iplik üretmek için süreci anlamak ve taklit etmek için yarış halindeler. Araştırma laboratuvarı yapay örümcek ipeği iplik temel güçlüklerden biri, ipek üreten bezlerin lifleri ekstrüzyon esnasında meydana gelen biyokimyasal süreçlerin tam bir anlayış içerir.
Burada yedi farklı ipek üreten bezlerin büyük ve küçük ampullate bezleri içeren cobweaving kara dul örümceğinin, 5,6, tubuliform [sentezler yumurta durumda ipek] [paletli vinç ve iskele ipek üreten] 7 izolasyonu için bir yöntem mevcut , 8, flagelliform [koçanı-dokumacılar bilinmeyen işlev] [tutkal ipek, toplam yapar] aciniform [sentezler av sarma ve yumurta durumda konuları] 9 ve piriform 10 [Ek disk ipek üretir]. Bu yaklaşım, karbondioksit gazı, karın cephalothoraksın sonraki ayırma ve ipek üreten bezlerin elde etmek için karın, mikrodiseksiyon örümcek anestezi dayanmaktadır. Farklı ipek üreten bezlerin ayrılmasını takiben, bu dokularda belirlemek için kantitatif gerçek zamanlı PCR, kuzey-ve batı blot, kütle spektrometresi (MS veya MS / MS) analizleri de dahil olmak üzere farklı biyokimyasal analizler için farklı makromoleküllerin almak için kullanılabilir yeni ipek protein dizileri, ipek montaj yolu katılırlar, ya da sağlam doku, hücre kültürü veya histolojik deneyler için kullanmak proteinleri araştırın.
Protokol
1. Karın örümcek ve izolasyon anestezi
- Plastik (Şekil 1A) ile kaplı bir karton kutunun içine bir cam kavanoz örümcek aktarın. Biz genellikle woodpiles, garajlar ya da çalılar örümcekler toplamak ve laboratuvarda cam kavanoz içinde onlara ev. Örümcek plastik astarı yukarı tırmanmak değil, çünkü bir cam kavanoz ya da kahve örümcek anestezi amaçlı küçük bir şişenin içine aktarmak için etkili bir yöntem sağlar. Bu noktada örümcek işleme, iki çift lateks eldiven veya güvenlik amaçlı bahçe eldiven giyiyor olmalıdır.
- Örümcek kutusundaki plastik ile kaplı olmasına rağmen, arka yaklaşım ve örümcek örümcek slayt, plastik kültürü şişe içine sağlar. Örümcek ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kara dul örümceği ipek üreten bezlerin mikrodiseksiyon metodolojisi yüksek derecede saflaştırılmış ipek üreten bezlerin elde etmek için etkili bir araç sunmaktadır. Diseksiyonlarının yedi ayrı komple bir set ipek üreten bezlerin cobweavers gelen verimli 1,5 ila 3 saat içinde tamamlanabilir. Yüksek derecede saflaştırılmış ipek bezi örnekleri elde edilmesi araştırmacılar farklı bezlerinde seçici genlerin mRNA düzeyleri kütle spektrometresi, analiz kullanarak glandüler luminal içeriğini içinde depolanan yeni ipek veya hast.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu çalışma, Black Widow Spider ipek bir NSF RUI Hibe MCB-0950372 başlıklı Moleküler Karakterizasyonu tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Sodyum klorür | Electron Microscopy Sciences | SX0420-1 | su içerisinde 0.1 M |
| Dietil pirokarbonat | Sigma-Aldrich | D-5758 - 5 ml | %0.1 v/v |
| Sodyum sitrat | Sigma-Aldrich | S1804 - 1 kg | su içerisinde 0.015 M |
| Diseksiyon mikroskobu | Leica Microsystems | Leica MZ16 | |
| Dijital mikroskop kamerası | Leica Microsystems | DFC320 | Yazılım - Leica Application Suite v2.8.1 |
| Vannas makası | World Precision Instruments, Inc. | 500260 | |
| Paslanmaz çelik pens | World Precision Instruments, Inc. | 501764 | Mini Dumont #M5S |
| Böcek iğneleri | Indigo Instruments | 33414-2 | Böcek iğneleri #2 |
| Küçük veya büyük diseksiyon kapları | Living Systems Instrumentation | DD-50-S veya DD-90-S | 52 mm çap x 18 mm Y (Sylgard Derinliği ~6mm) veya 93 mm x 22 mm |
| Drosophila kültür tüpleri | Carolina Biological | FR-17-3076 | Boyut 31.75 mm çap x 101.6 mm |
Kaynaklar
- Vollrath, F., Knight, D. P. Int. J. Biol. Macromol. 24, 243-243 (1999).
- Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S. J. Exp. Biol. 202, 3295-3295 (1999).
- Gosline, J. M., DeMont, M. E., Denny, M. W. Endeavour. 10, 31-31 (1986).
- Hinman, M. B., Jones, J. A., Lewis, R. V. Trends Biotechnol. 18 (9), 374-374 (2000).
- Lewis, R. V., Xu, M. Proc. Natl. Acad. Sci. 87, 7120-7120 (1990).
- Colgin, M. A., Lewis, R. V. Protein Sci. 7 (3), 667-667 (1998).
- Tian, M., Lewis, R. V. Appl. Phys....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
