Bir Fare Modelinde Cisterna Magna'ya Kanül İmplantasyonu

Özet

Kaynak: Xavier, A. L. R., et al. Kemirgenlerin Sarnıç Magna'sına Kanül İmplantasyonu. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu video, anestezi uygulanmış bir farenin cisterna magna'sına bir kanül yerleştirme prosedürünü göstermektedir. Teknik, iğneye monte edilmiş bir kanülün duradan ters üçgen cisterna magna'ya yönlendirilmesini ve beyin omurilik sıvısına hedeflenen iletim için sabitlenmesini içerir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Cerrahi prosedür
   NOT: Kronik cisterna magna (CM) kanülasyonu, hayvanların cerrahi prosedürden sonra iyileşmesini sağlar. CM enjeksiyonları kanül implantasyonundan bir gün sonra yapılır ve daha da önemlisi anestezi uygulanmış veya uyanık hayvanlarda yapılabilir. Bu bir iyileşme ameliyatı olduğu için işlemlerin steril şartlarda yapılması gerekir.
   1. Fareyi tartın (C57BL/6JRj, her iki cinsiyet, 8 hafta) ve intraperitoneal (i.p.) enjeksiyon yoluyla ketamin ve ksilazin (sırasıyla 100 mg/kg; 10 mg/kg) karışımı ile anestezi uygulayın. Gerekirse, cerrahi prosedür sırasında fareyi yarım doz ketamin (50 mg / kg) ile yeniden dozlayın. Alternatif olarak, kronik kanülasyon için, fareyi yaklaşık 1 L / dak oksijende (O₂) % 2.5 - 3 izofluran bir izofluran indüksiyon odasına yerleştirerek uyuşturun. Bu durumda, ameliyat boyunca izofluran anestezisini %1,5 - 2 oranında sürdürmek için bir burun konisi kullanın.
   2. Ayak parmağı sıkıştırma refleksleri durduğunda ve solunum yavaş ve sabit hale geldiğinde, hayvanı bir ısıtma yastığı üzerine stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin.
   3. Oftalmik merhem sürün. Gerektiğinde ameliyat sırasında tekrarlayın.
   4. Farenin başını ve boynunu tıraş edin, kürkünü çıkarın ve maruz kalan cildi önce alkollü bir çubukla ve ardından iki kez klorheksidin (% 0,5) veya iyot çözeltisi (% 2) ile sterilize edin. Sterilizasyonu iki kez daha tekrarlayın.
      NOT: Tıraştan sonra kalıntıları ve tüyleri temizlemek için cerrahi örtüyü değiştirin. Ardından, steril alanı korumak için hayvanı örtün.
   5. Kronik kanülasyon için, insizyon bölgesinde deri altına (s.c.) 0.5 - 1 ml lidokain / bupivakain (sırasıyla 1 mg / ml ve 0.25 mg / ml) uygulayın. Cerrahi sonrası analjezi için buprenorfin (0.05 mg / kg; sc) uygulayın.
   6. Fareyi stereotaksik çerçeveye sabitleyin. İntraaural veya elmacık arkı ile fiksasyonu sağladıktan sonra, başı vücuda 120°'lik bir açı oluşturacak şekilde hafifçe eğin (Şekil 1E).
   7. Kafatasının boyun kaslarının hemen üzerinde çıkıntı yapan kısmını bulun - oksipital tepe. Üstteki cildi bir cımbız kullanarak kaldırın ve orta hat boyunca yaklaşık 1 cm'lik badem şeklinde bir cilt parçası kesin. Ortaya çıkan kanamayı kontrol etmek için pamuklu çubuklar veya göz mızrakları kullanın.
   8. Oksipital tepeyi referans noktası olarak kullanarak, aşağıdaki boyun kaslarını ortaya çıkarmak için yüzeysel bağ dokusunu ayırın.
   9. Forsepsleri ön-arka eksende kesi bölgesinin ortasından dikkatlice geçirerek orta hattaki kasları ayırın. Her iki elinizde bir çift kavisli forseps ile, kafatasının alt kısmına yakın ortadaki uçları birleştirin ve kasları bir kenara çekin.
      NOT: Bu, yarı saydam dural membranın arkasında, yukarıda beyincik ve altta medulla ile özetlenen küçük bir ters üçgen olarak görünen CM'yi ortaya çıkarmalıdır (Şekil 1B ve 1C).
   10. Cerrahi bir göz mızrağı veya pamuklu çubuk kullanarak, CM'yi kaplayan dural zarı silin.
2. Kanülün CM
   1. 30G iğneyi borunun arka ucuna bağlı tutarak kanülü yapay beyin omurilik sıvısı (aCSF) dolu şırıngadan çıkarın.
   2. 30G iğnesini bir şırınga pompasına bağlı damıtılmış su dolu 100 μL'lik bir şırıngaya takın.
   3. Bir şırınga pompası yardımıyla havayı çekerek kanülün içine yaklaşık 1 cm'lik bir hava kabarcığı yerleştirin.
   4. Bir şırınga pompası kullanarak, istenen beyin omurilik sıvısı (BOS) izleyicisinin 12 μL'sini kanüle çekin.
   5. BOS izleyici ile doldurulmuş kanülü, baskın elde tutulan bir çift kavisli cımbızla tüp kaplı iğnenin yanından kavrayın. Baskın olmayan elin orta parmağını karşı tarafın kulak çubuğuna koyun ve daha sonra kanül için dinlenme olarak kullanmak üzere sabit tutun.
   6. Kanülü, fare kafasına göre 45°'lik bir açıyla yerleştirin ve CM'nin merkezine geçerek, duradan görülen üçgen yönü ile tanımlanır. Beyincik veya medullaya herhangi bir şekilde girmekten kaçının. İğnenin yalnızca 1 - 2 mm derinliğe, örneğin eğimin tamamen dura altında olduğu noktaya kadar batırıldığından emin olun. Kanülü tutan cımbızı serbest bırakın ve kanülün baskın olmayan elin üzerinde durmasına izin verin.
      NOT: Diş iğnelerinin eğimli ucu, CM'yi kaplayan dural membranı delmek için bir miktar kuvvet uygulanmasını gerektirecektir.
   7. Gerekirse, cerrahi bir göz mızrağı veya pamuklu çubuk kullanarak penetrasyon sırasında herhangi bir BOS sızıntısını kurulayın.
   8. Kanülü çevreleyen dural membran üzerine 2-3 damla siyanoakrilat yapıştırıcı uygulayın. Yapıştırıcıyı hemen iyileştirmek için bir damla tutkal hızlandırıcı ekleyin. Kafatasını ve iğneyi diş çimentosu (yaklaşık 0.5 mg) ve siyanoakrilat tutkal (3-5 damla) karışımı ile örtün. Hemen ardından, kürlemek için bir damla tutkal hızlandırıcı uygulayın.

Sonuçlar

Şekil 1: Cisterna magna'ya izleyicilerin enjeksiyonu. (Bir) Cisterna magna'nın (CM) beyin ve kafatası yapılarına göre konumunu gösteren fare kafası ve beynin şematik genel bakışı. (B) Çevredeki boyun kasları künt bir şek...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
SOPIRA carpule 30G 0.3 x 12 mm	Kulzer	AA001
Chlorhexidine 0.5% (klorheksidin diglukonat)	Meda AS		http://www.meda.dk/behandlingsomrader/desinfektion/desinfektion-af-hud/klorhexidin-sprit-medic-05/
Alkollü çubuk %70 izopropil alkol 30 x 60 mm	Vitrex Medical A/S	520213
Viskoese Oejendraeber Ophtha	Ophtha	145250
Ahşap aplikatör, çift pamuklu çubuk (Ø yaklaşık, 4 - 5 mm, uzunluk yaklaşık, 12 mm)	Heinz Herenz	1032018
Göz mızrakları	Medicom	A18005
Kimtech Science hassas mendil doku silecekleri	Kimberly Clark Professional	5511
Loctite süper yapıştırıcı hassas 5 g	Loctite		http://www.loctite-consumer.dk/da/produkter/superglue-liquid.html
Insta-Set CA hızlandırıcı	Bob Smith Industries	BSI-152
Dental çimento tozu	A-M Sistemleri	525000
Fosfat tamponlu salin (PBS; 0.01 M; pH 7.4)	Sigma Aldrich	P3813
Ovalbumin, Alexa Fluor 647 konjugat	Thermo Fisher Scientific	O34784
DAPI (4 ",6-diamidino-2-fenilindol) çözelti (1 mg/mL)	Thermo Fisher Scientific	62248
Dekstran, floresein, 3000 MW, anyonik	Thermo Fisher Scientific	D3305
Ketaminol Vet 100 mg/mL (ketamin)	Intervet International BV	511519
Rompin Vet 20 mg/mL (ksilazin)	KVP Pharma + Veterinär Produkte GmbH	148999
Ksilokain 20 mg/mL (lidokain)	AstraZeneca	158543
Marcain 2.5 mg/mL (bupivakain)	AstraZeneca	123918
Bupaq Vet 0.3 mg/mL (buprenorfin)	Richter Pharma AG	185159