Biyomimetik boncuklar kullanılarak bakteri-konak hücre etkileşimlerinin değerlendirilmesi

Abstract

Kaynak: Stones, D. H., et al. Bakteri-konak etkileşimlerini karakterize etmek için biyomimetik malzemeler. J. Vis. Uzm. (2015)

Bu video, rekabetçi koşullar altında konakçı epitel hücrelerine bakteriyel yapışmayı ölçmek için bakteriyomimetik boncukların kullanımını göstermektedir. Hücrelerin işlenmesi, parçalanması ve koloni oluşturan birimleri ölçmek için seri seyreltmelerin kaplanması ile ilgili adımları ana hatlarıyla belirtir.

Protocol

1. Bakteriyel yapışma ölçümü
   1. Belirtilen zaman noktalarında (örneğin, enfeksiyondan 1 saat sonra), ortamı hücre katmanından çıkarın.
   2. Bağlanmamış hücreleri çıkarmak için hücre katmanını steril, önceden ısıtılmış fosfat tamponlu salin (PBS) (her biri 1 ml PBS'den en az 3-4 yıkama) ile iyice yıkayın.
   3. Kuyucuk başına PBS'ye 1 ml steril %1 v/v Triton X-100 çözeltisi ekleyerek konakçı hücreleri parçalayın. Plakayı 37 °C'de 5 dakika inkübe edin.
   4. Her bir oyuğun içeriğini ayrı 1,5 ml'lik tüplere aktarmadan önce her numuneyi birkaç kez yukarı ve aşağı pipetleyin. Steril PBS'ye 10 kat seri numune seyreltmeleri hazırlayın (ör., 100 ml numune ve 900 ml PBS kullanın).
   5. Her numuneden 100 μl'lik bir plakayı deniz Luria-Bertani (MLB) agar üzerine koyun ve bir hücre yayıcı kullanarak yayın. Bakteri suşlarına ve zaman noktasına bağlı olarak plakaya hangi seyreltmeleri optimize edin.
      Not: Açıklanan deney düzeneği için, 10⁵ veya 10⁶ katlı seyreltme, uygun sayıda koloni oluşturan birim (CFU) verir.
   6. Plakaları 37 °C O/N'de inkübe edin ve koloni sayımı ile bakterileri sayın.

Materials