Dış Membran Vezikülleri ile Ön İşlem Görmüş Makrofajlarda Legionella pneumophila Replikasyonunun Test Edilmesi

Özet

Kaynak: Jung, A. L. et. al., Legionella pneumophila Dış Membran Vezikülleri: Makrofajlar Üzerindeki Pro-inflamatuar Potansiyellerinin İzolasyonu ve Analizi. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, bakteri replikasyonu üzerindeki etkilerini incelemek için makrofajların Legionella pneumophila dış zar vezikülleri (OMV'ler) ile ön tedavisini göstermektedir. OMV'ler, konakçı bağışıklık sinyalini değiştirerek makrofajları enfeksiyona karşı daha izin verici hale getirir. Tedavi edilen hücrelerde tedavi edilmeyen hücrelere kıyasla daha yüksek koloni sayıları, OMV'lerin makrofajlar içinde L. pneumophila replikasyonunu desteklediğini gösterir.

Protokol

1. Ön tedavi Makrofajları

1. THP-1 (Tohoku Hastanesi Pediatri-1 hücreleri, bir insan monositik lösemi hücre hattı) hücrelerini hazırlayın.
   NOT: THP-1, bir lösemi hastasından türetilen monositik bir hücre hattıdır.
   1. 24 kuyucuk başına 2x10⁵ THP-1 hücresi ekleyin ve makrofaj benzeri hücrelere 20 nM forbol 12-miristat 13-asetat (PMA) ekleyerek bunları farklılaştırın. 37 °C'de 24 saat inkübe edin.
   2. Ortamı 500 μL taze ortamla değiştirin ve 24 saat daha inkübe edin; THP-1 hücreleri için en uygun ortam,% 10 fetal buzağı serumu ile desteklenmiş Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) 1640 yü....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
10 cm petridish	Sarstedt AG & Co KG (Nuembrecht, Almanya)	82.1473
Aktif karbon	Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Almanya)	X865.2
Agar-agar, Kobe I	Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Almanya)	5210.2
% 5 koyun kanı içeren Columbia agar	Becton Dickinson GmbH (Heidelberg, Almanya)	254005
Ferric nitrat nonahidrat	Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Almanya)	5632.1
Fetal buzağı serumu (FCS)	Life Technologies GmbH (Darmstadt, Almanya)	10270-106
Heracell 240i Karbondioksit inkübatörü	Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Braunschweig, Almanya)	40830469
Heraeus Multifuge X3R	Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Braunschweig, Almanya)	75004515
Aşılama döngüsü	Sarstedt AG & Co KG (Nuembrecht, Almanya)	86.1567.010
L. pneumophila Corby	---	---	Prof Dr Antje Flieger (RKI, Berlin, Almanya)
L. pneumophila Corby ΔflaA	---	---	Prof Dr Klaus Heuner (RKI, Berlin, Almanya)
	sağlanmıştırmBMDM	---	Prof Dr Markus Schnare (Philipps University Marburg, Marburg, Almanya) ve Prof Dr Carsten Kirschning (Duisburg Essen Üniversitesi, Essen, Almanya) tarafından sağlanmıştırPBS
	Biochrom GmbH (Berlin, Almanya)	L 1825
Phorbol 12-miristate 13-asetat	Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Taufkirchen, Almanya)	P8139-1MG
Döner çalkalayıcı (MaxQ 6000)	Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Braunschweig, Almanya)	SHKE6000
RPMI 1640 yüksek glikozlu	Life Technologies GmbH (Darmstadt, Almanya)	11875-093
Saponin	Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Almanya)	9622.1
Ultrospec 10	Biochrom Ltd (Cambridge, İngiltere)	80-2116-30
THP-1	Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Taufkirchen, Almanya)	88081201-1VL
Sorvall Discovery 100 SE	Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Braunschweig, Almanya)
Maya özütü	Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Almanya)	2363.2

tarafından---