Süreksiz yoğunluk gradyanı kullanılarak bakterilerin kapsül miktarına göre ayrılması

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Feltwell, T., et.al. süreksiz bir yoğunluk gradyanı kullanarak bakterileri kapsül miktarına göre ayırmak. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, kapsül miktarına göre bakteri suşlarını ayırmak için süreksiz bir yoğunluk gradyanının kullanımını göstermektedir. Bir transpozon mutant kütüphanesini gradyan boyunca santrifüjleyerek, farklı kapsül yoğunluklarına sahip bakteriler farklı katmanlara lokalize olur. Ayrılan fraksiyonlar daha sonra aşağı akış analizi için toplanabilir.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Hazırlanan Hücrelerin Degradelere Eklenmesi ve Santrifüjleme ile Ayrılması

600 μL hazırlanmış hücreleri tüpteki gradyanın üstüne çok yavaş ve arayüzü karıştırmadan ekleyin.
Tüpleri tüp adaptörlerine yerleştirin ve dengeli olduklarından emin olmak için birleşik adaptörleri ve tüpleri tartın.
1. Tüp adaptörlerini tezgah üstü santrifüj içindeki sabit açılı bir rotora yerleştirin. 3.000 x g'da 30 dakika santrifüjleyin.
2. Santrifüjlemeden sonra, tüpleri dikkatlice çıkarın, uygun bir rafa yerleştirin ve sonuçları bir kayıt olarak fotoğraflayın.
Üronik asit miktar tayini veya DNA ekstrak....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number
Percoll	GE Healthcare	17-0891-01
Rotor A-4-81 ve 500ml kovalı Santrifüj 5810R	Eppendorf	5810 718.007
15 ml tüpler için adaptörler	Eppendorf	5810 722.004
Sabit açılı rotor F-34-6-38	Eppendorf	5804 727.002
2.6 - 7 ml tüp adaptörü	Eppendorf	5804 739.000
Santrifüj 5424 Rotor dahil FA-45-24-11	Eppendorf	5424 000.460
5 ml polipropilen yuvarlak tabanlı boru	Falcon	352063

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission