Bu video, antijene özgü T hücresi-dendritik hücre etkileşimleri yoluyla bakteriyel transenfeksiyonu göstermektedir. Ovalbümin peptidi sunan bakteri ile enfekte dendritik hücreler, doğrudan veya bir zarla ayrılmış T hücreleri ile inkübe edilir. Doğrudan temas, immünolojik sinaps oluşumuna izin vererek bakteri transferini sağlarken, zar etkileşimi engeller. Gentamisin tedavisi daha sonra hücre dışı bakterileri yok etmek için yapılır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İmmünolojik Sinaps Oluşumu Yoluyla T Hücrelerinin İn Vitro Bakteriyel Transenfeksiyonu
452 görüntülenme
⸱
26 Eylül 2025
Bu makalede
Özet
Protokol
Not: Fareler spesifik patojen içermeyen (SPF) muhafazalarda yetiştirildi ve eğitimli ve kalifiye personel tarafından karbondioksit (CO2 ) inhalasyon yöntemi kullanılarak ötenazi yapıldı.
1. Fare Kemik İliğinden Kaynaklanan Dendritik Hücreler (DC'ler) Farklılaşması ve EnfeksiyonNot: Şekil 1 bu ilk adımı özetlemektedir. Bu noktadan itibaren tüm işlemler davlumbazda sadece steril ortam, aletler, pipet uçları ve kültür kapları kullanılarak gerçekleştirilmelidir.
- Fare Kemik İliğinden Türetilen DC'lerin Farklılaşması
- Bir C57/BL6 faresinden kaval kemiği ve femurları inceleyin ve ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1. DC üretimi ve CD4+ T hücre izolasyonunun akış şeması. Şeklin sol tarafında, dendritik hücreleri (DC'ler) kemik iliği hücrelerinden ayırt etme süreci detaylandırılmıştır. Femur ve kaval kemiği diseke edildikten sonra kemik.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| devir sayısı | Fisher Bilimsel | SH3025501 | |
| r-GMCSF | Peprotech | 315-03 | |
| LPS | SİGMA | L2630-10mg | |
| Na piruvat | Termo Bilimsel | SH3023901 | |
| 2-BEN | Gibco | 31350-010 | |
| OVAp OTII (323–339) | GenScript | --- | |
| Hücre Süzgeci 70uM | BD | 352350 | |
| 30uM Şırınga Filcons Steril | BD | 340598 | |
| AutoMac'ler Klasik | Miltenyi Biotec | 130-088-887 | |
| Gentamisin | Normon | 624601.6 | |
| Transwell | Yıldız | 3415 | |
| LB | Pronadisa Hakkında | 1231 | |
| Agar | Pronadisa Hakkında | 1800 | |
| Paraformaldehit %16 | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 15710 | |
| Triton X-100 | |||
| CD8 biyot | BD Biyolojik Bilimler | 553029 | |
| IgM Biyot | İmmünoadım | RMM-1'i klonlayın | |
| B220 Biyot | BD Biyolojik Bilimler | 553086 | |
| CD19 biyot | BD Biyolojik Bilimler | 553784 | |
| MHC-II Biot (I-A/I-E) | BD Biyolojik Bilimler | 553622 | |
| CD11b biyot | İmmünoadım | 11BB-01mg | |
| CD11c biyot | İmmünoadım | 11CB3-01mg | |
| DX5 biyot | BD Biyolojik Bilimler | 553856 | |
| Gr-1 biyot | BD Biyolojik Bilimler | 553125 | |
| CD16/CD32 | İmmünoadım | M16PU-05MG | |
| anti Salmonella | ABD Serotec | 8209-4006 | |
| CD11cPE | BD Biyolojik Bilimler | 553802 | |
| CD4-APC | Tonbo Biyolojik Bilimler | 20-0041-U100 | |
| Gr-1 ZPT | BD Biyolojik Bilimler | 553129 | |
| MHC-II (I-A/I-E) FITC | BD Biyolojik Bilimler | 553623 | |
| Alexa-Fluor 647 Keçi Anti-Tavşan IgG (H+L) Antikoru, yüksek oranda çapraz adsorbe edilmiş | Davetli | A-21245 Serisi | |
| CMAC (7-amino-4-klorometilkumarin) | Yaşam teknolojileri | C2110 | |
| BSA | SİGMA | A7030-100G | |
| Streptavidin Mikro Boncuklar | Miltenyi Biotec | 130-048-101 | |
| BD FACSCanto II | BD Biyolojik Bilimler | --- |
