Hidrojen sülfür üreten bakterilerin tespiti için hassas bir görsel yöntem

Özet

Kaynak: Zhu, W., & Chu, W. Hidrojen Sülfür Üreten Bakterilerin Tespiti için Hassas Görsel Yöntem. J. Vis. Uzm. (2022)

Bu video, hidrojen sülfür üreten bakterilerin hızlı tespiti için hassas bir görsel yöntemi göstermektedir. Sarıdan siyaha renk değişimi, bizmut sülfür oluşumu yoluyla bakteriyel aktiviteyi gösterir.

Protokol

1. Bakteri suşları

NOT: Bu deney için Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris ve Klebsiella pneumoniae dahil olmak üzere dokuz standart suş kullanıldı. Salmonella paratyphi A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa ve Proteus vuigaris H₂S üretebilir .

1. Bakteri kültürünün hazırlanması
   1. Bir bakteri kolonisini aktarın Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1 ve Klebsiella pneumoniae bir Luria-Bertani (LB) agar plakasından 100 mL LB ortamına ve bakteri konsantrasyonu yaklaşık 1 x 10⁹ hücre/mL olana kadar 37 °C'de 12-16 saat kültürleyin (OD₆₀₀ ile belirtildiği gibi) = 1).
   2. Bir bakteri kolonisi Fusobacterium nucleatum ve Proteus vuigaris triptikaz soya suyu (TSB) agar plakalarından 100 mL TSB ortamına aktarın ve bakteri konsantrasyonu yaklaşık 1 x 10⁹ hücre / mL olana kadar 24 saat boyunca anaerobik olarak 37 ° C'de kültürleyin (OD₆₀₀ = 1 ile gösterildiği gibi).

2. H₂S algılama testi

1. Hidrojen sülfür üretim testi
   1. 100 μL bakteri kültürünü 100 μL yeni hazırlanmış bizmut çözeltisi (pH 8.0; 10 mM bizmut (III) klorür, 0.4 M trietanolamin-HCl, 20 mM piridoksal 5-fosfat monohidrat, 20 mM EDTA (Etilendiamintetraasetik asit) ve 40 mM L-sistein) 96 oyuklu mikrotitre plakalarında karıştırın ve 37 °C'de 20 dakika kültürleyin. Her bakteri suşu için analizi üç kopya halinde gerçekleştirin.
   2. 20 dakika sonra renk değişimini kontrol edin. Çözeltinin rengi açık sarıdan siyaha değişirse, bu bakterinin H₂S üretebildiğini gösterir. Bu ölçümü 3x tekrarlayın.
2. Yöntemin hassasiyeti
   1. Farklı konsantrasyonlarda sodyum hidrosülfür (NaHS) kullanarak yöntemin hassasiyetini belirleyin: 2 mM, 1 mM, 0,8 mM, 0,6 mM, 0,4 mM, 0,2 mM, 0,1 mM ve 0 mM, BS (Bizmut sülfür) çözeltisi ile karıştırılmış.
   2. Siyah bir BS çökeltisinin oluşumunu gözlemleyerek HS⁻/S²⁻ 'nin varlığını belirleyin. Renk üretimi olmadan (-) en koyu siyah renk üretimine (++++++) kadar görsel bir ölçek kullanarak kuyucukların rengini puanlayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Bizmut (III) klorür	Şangay Macklin Biyokimya Co, Ltd	7787-60-2
EDTA	Nanjing Kimyasal Reaktif Co, Ltd	60-00-4
Fusobacterium nucleatum	ATCC	25586
L-sistein	Amresco	52-90-4
Trietanolamin-HCl	Şangay Aladdin Biyokimyasal Teknoloji Co., Ltd.	637-39-8
Sodyum hidrosülfür
Pipet