$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Bakteri suşları
NOT: Bu deney için Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris ve Klebsiella pneumoniae dahil olmak üzere dokuz standart suş kullanıldı. Salmonella paratyphi A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa ve Proteus vuigaris H2S üretebilir .
- Bakteri kültürünün hazırlanması
- Bir bakteri kolonisini aktarın Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1 ve Klebsiella pneumoniae bir Luria-Bertani (LB) agar plakasından 100 mL LB ortamına ve bakteri konsantrasyonu yaklaşık 1 x 109 hücre/mL olana kadar 37 °C'de 12-16 saat kültürleyin (OD600 ile belirtildiği gibi) = 1).
- Bir bakteri kolonisi Fusobacterium nucleatum ve Proteus vuigaris triptikaz soya suyu (TSB) agar plakalarından 100 mL TSB ortamına aktarın ve bakteri konsantrasyonu yaklaşık 1 x 109 hücre / mL olana kadar 24 saat boyunca anaerobik olarak 37 ° C'de kültürleyin (OD600 = 1 ile gösterildiği gibi).
2. H2S algılama testi
- Hidrojen sülfür üretim testi
- 100 μL bakteri kültürünü 100 μL yeni hazırlanmış bizmut çözeltisi (pH 8.0; 10 mM bizmut (III) klorür, 0.4 M trietanolamin-HCl, 20 mM piridoksal 5-fosfat monohidrat, 20 mM EDTA (Etilendiamintetraasetik asit) ve 40 mM L-sistein) 96 oyuklu mikrotitre plakalarında karıştırın ve 37 °C'de 20 dakika kültürleyin. Her bakteri suşu için analizi üç kopya halinde gerçekleştirin.
- 20 dakika sonra renk değişimini kontrol edin. Çözeltinin rengi açık sarıdan siyaha değişirse, bu bakterinin H2S üretebildiğini gösterir. Bu ölçümü 3x tekrarlayın.
- Yöntemin hassasiyeti
- Farklı konsantrasyonlarda sodyum hidrosülfür (NaHS) kullanarak yöntemin hassasiyetini belirleyin: 2 mM, 1 mM, 0,8 mM, 0,6 mM, 0,4 mM, 0,2 mM, 0,1 mM ve 0 mM, BS (Bizmut sülfür) çözeltisi ile karıştırılmış.
- Siyah bir BS çökeltisinin oluşumunu gözlemleyerek HS−/S2− 'nin varlığını belirleyin. Renk üretimi olmadan (-) en koyu siyah renk üretimine (++++++) kadar görsel bir ölçek kullanarak kuyucukların rengini puanlayın.