Sıçan Pulmoner Endotel Hücrelerinin Bakteriyel Enfeksiyonunu Takiben Sitotoksik Amiloidlerin Elde Edilmesi

Bu makalede

Özet

Kaynak: Balczon, R., ve diğerleri. Pulmoner Endotel Hücrelerinin Pseudomonas aeruginosa Tarafından Enfeksiyonunu Takiben Sitotoksik Amiloidleri Saptama Yöntemleri. J. Vis. Deneyim (2018)

Bu video, Pseudomonas aeruginosa enfeksiyonunu takiben pulmoner endotel hücrelerinden sitotoksik süpernatant üretme prosedürünü göstermektedir. Bakteriyel efektör proteinlerin konakçı hücre yapısını nasıl bozduğunu ve sitotoksik amiloid oligomerlerinin süpernatana salınmasını nasıl indüklediğini özetlemektedir.

Protokol

Sitotoksik Süpernatanların Üretimi:

Sıçan pulmoner mikrovasküler endotel hücrelerinin (PMVEC'ler) birincil kültürleri, Güney Alabama Üniversitesi Akciğer Biyolojisi Merkezi'ndeki Hücre Kültürü Çekirdek Tesisinden elde edildi.

Sitotoksik süpernatanların üretimi için, 2 x 10⁶ hücreyi ayrı ayrı 150 cm'lik tabaklara koyun ve birleşme sağlanana kadar 3-4 gün boyunca büyütün. Deney başına iki plaka kullanın.
Süpernatan üretmek için, 150 cm'lik iki PMVEC kabından birini fosfat tamponlu salinle yıkayın, tripsinize edin ve ardından hücreleri sayın. PMVEC'lerin diğer kabını Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS)....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1. P. aeruginosa aşılamasının PMVEC morfolojisi üzerine etkileri. PA103 suşunun eklenmesinden (A) önce ve (B)'den dört saat sonra PMVEC'lerin birleşik bir tek tabakası. Enfekte hücrelerdeki hücre tek tabakasında boşluklar aç.......