Biyolüminesans Kullanarak Farede Bakteriyel Enfeksiyon Dinamiklerini İzleme

Özet

Kaynak: Valentine, M. E., ve diğerleri. Pseudomonas aeruginosa'da Çerçeve İçi Gen Silme Mutantlarının Üretilmesi ve Basit Bir Fare Enfeksiyon Modelinde Virülans Zayıflaması Testi. J. Vis. Uzm. (2020)

Bu video, farelerde öldürücü ve zayıflatılmış bakteri suşlarının in vivo davranışını görselleştirmek ve karşılaştırmak için biyolüminesans kullanımını göstermektedir. Biyolüminesans bakteri süspansiyonlarının hazırlanmasını ve bunların farelere intraperitoneal enjeksiyonunu özetlemektedir. Öldürücü suş sistemik yayılma sergilerken, zayıflatılmış suş lokalize kalır ve sönümleme sinyalinin gösterdiği gibi kademeli olarak temizlenir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Bakterilerin Enjeksiyon Yoluyla Bakteri Suşları ile Aşılanması
   1. Enjeksiyonların sabahı, test edilen bakteri suşlarının kriyovyallerini çıkarın ve 4 ° C'de 3-4 saat çözün. Enjekte edilecek her fare için 0,5 mL çözün. Çözüldükten sonra şişeleri buz üzerinde tutun ve farelere 2 saat içinde enjekte edin.
   2. Çözüldükten sonra, her bir kriyoviyal yeni bir 2 mL'lik tüpe aktarın ve 10 dakika boyunca 4.500 x g'da santrifüjleyin, süpernatanı atın ve hücre peletini 1 mL 1x PBS ....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Düz kapaklı 0,2 mL tüpler	Termo Bilimsel	AB-0620 Serisi	üzerinden Fisher Bilimsel
1 mL Şırınga	BD	22-253-260	üzerinden Fisher Bilimsel
1,5 mL Mikrosantrifüj Tüpleri	Fisher Bilimsel	05-408-129
2.0 mL Kriyojenik Şişeler	Corning	430659	üzerinden Fisher Bilimsel
27G iğne	BD	14-821-13B	üzerinden Fisher Bilimsel
Tezgah Üstü Santrifüj 5804R	Eppendorf Belediyesi	04-987-372	üzerinden Fisher Bilimsel
Tezgah Üstü Mikrosantrifüj	Sorvall	75-003-287	üzerinden Fisher Bilimsel
IVIS Lumina XRMS Serisi III İn Vivo Görüntüleme Sistemi	Perkins ve Elmer	CLS136340
Fosfat tamponlu tuzlu su tozu	Sigma	P3813-10PAK	Sigma-Aldrich